| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 符号说明及缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-36页 |
| ·丝状真菌纤维素酶的表达调控研究进展 | 第16-25页 |
| ·丝状真菌纤维素酶表达的调控机制 | 第17-22页 |
| ·丝状真菌纤维素酶基因的表达调控因子 | 第22-25页 |
| ·丝状真菌转化系统研究进展 | 第25-29页 |
| ·丝状真菌转化方法 | 第26-27页 |
| ·丝状真菌转化系统的选择标记 | 第27-28页 |
| ·丝状真菌转化系统在纤维素酶研究中的应用 | 第28-29页 |
| ·全基因组基因表达的转录分析方法 | 第29-34页 |
| ·基因芯片技术 | 第30-31页 |
| ·cDNA扩增片段长度多态性分析 | 第31-32页 |
| ·基因表达系列分析 | 第32-33页 |
| ·基于新一代Solexa测序技术的数字表达谱分析 | 第33-34页 |
| ·本研究的主要目的和主要研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 斜卧青霉114-2表达谱分析 | 第36-64页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料和方法 | 第36-42页 |
| ·菌株和培养基 | 第36-37页 |
| ·菌株的培养方法 | 第37页 |
| ·常用储备液和缓冲液 | 第37页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·总RNA的提取和处理 | 第38-39页 |
| ·表达谱测序 | 第39-40页 |
| ·数据分析 | 第40-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-61页 |
| ·总RNA提取结果 | 第42-43页 |
| ·表达谱数据库的构建与差异表达标签的统计 | 第43-45页 |
| ·基于斜卧青霉基因组数据库的表达标签注释 | 第45-48页 |
| ·表达谱差异基因的筛选 | 第48-60页 |
| ·基因功能显著性富集分析 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第三章 实时荧光定量PCR检测斜卧青霉部分基因转录水平变化 | 第64-80页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·材料和方法 | 第64-71页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第64-66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·常用缓冲液、主要试剂和仪器 | 第66-67页 |
| ·RT-qPCR标准曲线的制作 | 第67-69页 |
| ·斜卧青霉的培养与RNA的提取 | 第69页 |
| ·cDNA的合成 | 第69页 |
| ·对斜卧青霉已克隆基因的实时荧光定量PCR分析 | 第69页 |
| ·破碎斜卧青霉菌丝获取胞内蛋白 | 第69-70页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE及银染 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-77页 |
| ·RT-qPCR标准曲线的制作 | 第71页 |
| ·RT-qPCR对9种基因在诱导与阻遏条件下的转录分析 | 第71-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 第四章 斜卧青霉遗传操作系统的建立及瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ的异源表达 | 第80-96页 |
| ·引言 | 第80页 |
| ·材料和方法 | 第80-86页 |
| ·菌株和质粒 | 第80-81页 |
| ·培养基 | 第81页 |
| ·常用缓冲液、主要试剂、工具酶和仪器 | 第81-83页 |
| ·斜卧青霉114-2尿嘧啶缺陷型菌株的筛选 | 第83页 |
| ·整合型表达载体ANIp7-cel5A的构建 | 第83-84页 |
| ·斜卧青霉M12原生质体的制备和转化 | 第84页 |
| ·斜卧青霉转化子的染色体基因组小量提取 | 第84-85页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第85页 |
| ·SDS-PAGE、内切葡聚糖酶活性染色 | 第85页 |
| ·Western-blot | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-93页 |
| ·斜卧青霉114-2尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选 | 第86-88页 |
| ·整合型表达载体ANIp7-cel5A的构建与转化 | 第88-90页 |
| ·瑞氏木霉Ce15A在斜卧青霉中的表达 | 第90-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| ·小结 | 第94-96页 |
| 第五章 斜卧青霉114-2液泡型丝氨酸蛋白酶基因的敲除 | 第96-114页 |
| ·引言 | 第96-97页 |
| ·材料和方法 | 第97-103页 |
| ·菌株和质粒 | 第97页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·常用缓冲液、主要试剂、工具酶与仪器 | 第97页 |
| ·简并引物设计与PCR扩增vsp基因 | 第97-98页 |
| ·TAIL-PCR扩增vsp基因5’端和3’端 | 第98-100页 |
| ·SEFA-PCR扩增vsp基因5’端和3’端 | 第100-102页 |
| ·测序与序列分析 | 第102页 |
| ·敲除载体pK-vsp的构建 | 第102页 |
| ·敲除载体的转化与敲除子筛选 | 第102-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-112页 |
| ·斜卧青霉液泡型丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆 | 第103-104页 |
| ·TAIL-PCR扩增液泡型丝氨酸蛋白酶基因5’端和3’端序列 | 第104-105页 |
| ·SEFA-PCR扩增液泡型丝氨酸蛋白酶基因的5’和3’端序列 | 第105-109页 |
| ·敲除载体pk-vsp的构建 | 第109-110页 |
| ·敲除子的鉴定 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 全文总结与展望 | 第114-116页 |
| 1 本论文取得的创新性结果 | 第114-115页 |
| 2 本论文存在的问题及深入方向 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-136页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第139页 |
