| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| ·BARF1基因的研究背景 | 第11-16页 |
| ·BARF1的结构和生物学特征 | 第11-12页 |
| ·BARF1与细胞基因的表达 | 第12-13页 |
| ·BARF1基因的细胞特异性 | 第13-14页 |
| ·BARF1与GC | 第14页 |
| ·BARF1与NPC | 第14-15页 |
| ·BARF1与乳腺癌 | 第15页 |
| ·BARF1基因的致瘤机制 | 第15-16页 |
| ·小结 | 第16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16页 |
| ·研究的内容及技术路线 | 第16-18页 |
| ·研究内容 | 第17页 |
| ·技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 BARF1真核表达载体的构建 | 第18-30页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·菌种和载体 | 第18页 |
| ·细胞和培养基 | 第18页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第18页 |
| ·主要溶剂及配制 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-25页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·总RNA提取和逆转录 | 第20-21页 |
| ·BARF1目的基因的扩增 | 第21-22页 |
| ·目的片段胶回收与纯化 | 第22页 |
| ·BARF1 T-A克隆和测序 | 第22-23页 |
| ·BARF1真核表达载体的构建和鉴定 | 第23-25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·BARF1基因的T-A克隆及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·DNA序列测定 | 第26页 |
| ·真核表达载体的构建与鉴定 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 BARF1基因表达的胃癌细胞系SGC7901单克隆的获得 | 第30-36页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·细胞和培养基 | 第30页 |
| ·一般试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·溶液配制 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·细胞培养 | 第31页 |
| ·细胞转染 | 第31页 |
| ·有限稀释法克隆 | 第31页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第31-33页 |
| ·结果 | 第33-34页 |
| ·单克隆细胞的获得 | 第33页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 BARF1基因对胃癌细胞生物行为的影响 | 第36-47页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·细胞和培养基 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·细胞培养 | 第37页 |
| ·细胞增殖试验 | 第37页 |
| ·软琼脂集落形成试验 | 第37-38页 |
| ·Hoechst 33342荧光染色 | 第38页 |
| ·顺铂诱导细胞凋亡测定 | 第38页 |
| ·DNA梯状条带试验 | 第38页 |
| ·细胞迁移试验 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-44页 |
| ·细胞增殖试验 | 第39-40页 |
| ·软琼脂集落形成试验 | 第40-41页 |
| ·细胞凋亡测定 | 第41页 |
| ·Hoechst 33342荧光染色 | 第41-42页 |
| ·DNA梯状条带测定 | 第42-43页 |
| ·细胞迁移实验 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 第五章 结论与展望 | 第47-48页 |
| ·主要结论 | 第47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 硕士期间发表的论文和参加的课题 | 第55页 |