| 目录 | 第1-11页 |
| 致谢 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 缩略表 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-35页 |
| ·真核生物基因上游结构及作用模式 | 第18-20页 |
| ·植物启动子的研究进展 | 第20-24页 |
| ·组成型启动子 | 第20-22页 |
| ·特异型启动子 | 第22-23页 |
| ·诱导型启动子 | 第23-24页 |
| ·根特异启动子 | 第24-29页 |
| ·非植物内源的根特异启动子 | 第25页 |
| ·植物内源的根特异启动子 | 第25-29页 |
| ·双子叶植物 | 第25-28页 |
| 拟南芥 | 第26页 |
| 烟草 | 第26-27页 |
| 大豆 | 第27页 |
| 其它双子叶植物 | 第27-28页 |
| ·单子叶植物 | 第28-29页 |
| 水稻 | 第28页 |
| 大麦 | 第28-29页 |
| 玉米 | 第29页 |
| ·植物启动子研究技术路线概述 | 第29-32页 |
| ·植物启动子预测数据库 | 第29-30页 |
| ·核心启动子附近内含子对转录调控的影响 | 第30-31页 |
| ·启动子缺失分析 | 第31页 |
| ·突变及获得或失去功能分析 | 第31-32页 |
| ·调控元件与结合蛋白互作分析 | 第32页 |
| ·本研究的目的意义及创新之处 | 第32-35页 |
| 第二章 、水稻根特异表达基因的筛选 | 第35-50页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-41页 |
| ·样品准备 | 第35-36页 |
| ·水稻总RNA提取 | 第36页 |
| ·逆转录 | 第36-37页 |
| ·芯片杂交 | 第37页 |
| ·半定量RT-PCR | 第37-38页 |
| ·实时定量RT-PCR分析(SYBR Green Ⅰ) | 第38-40页 |
| ·OsAct1,Os03g01700,Os02g37190,OsUbil及OsCc1质粒标准品的制备 | 第40页 |
| ·标准曲线的制备 | 第40-41页 |
| ·DNA拷贝数计算 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·Affymetrix芯片筛选水稻根特异表达基因 | 第41-42页 |
| ·侯选基因在水稻在不同发育阶段的各组织中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·OsAct1,OsUbi1,OsCc1,Os03g01700与Os02g37190标准曲线 | 第43-45页 |
| ·OsAct1,OsUbi1,OsCc1,Os03g01700与Os02g37190拷贝数 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 、水稻根特异启动子Os03g01700,Os02g37190调控GUS的表达分析 | 第50-60页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·水稻基因组DNA的大量提取 | 第50-51页 |
| ·水稻根特异启动子融合GUS载体构建 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第52-55页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的准备 | 第52-53页 |
| ·电转化农杆菌感受态细胞的制备 | 第53页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第53-54页 |
| ·农杆菌的培养 | 第54页 |
| ·共培养及抗性愈伤的筛选 | 第54页 |
| ·抗性愈伤的分化及成苗 | 第54-55页 |
| ·转基因苗的锻炼和移栽 | 第55页 |
| ·GUS组织化学染色及显微观察 | 第55-56页 |
| ·转基因材料根部GUS组组化学染色观察 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 、水稻根特异启动子缺失分析 | 第60-79页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-65页 |
| ·根特异启动子Os03g01700和Os02g37190调控元件分析 | 第60页 |
| ·根特异启动子缺失载体的构建 | 第60-63页 |
| ·瞬时表达(基因枪法) | 第63-65页 |
| ·样品的预处理 | 第63-64页 |
| ·微弹的制备 | 第64页 |
| ·质粒的包裹 | 第64页 |
| ·PDS-1000/He型基因枪的操作步骤 | 第64-65页 |
| ·轰击后样品的处理 | 第65页 |
| ·GUS染色、观察 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-77页 |
| ·Os03g01700和Os02g37190启动子调控元件PlantCARE分析 | 第65-69页 |
| ·Os03g01700启动子调控元件PlantCARE分析结果 | 第65-67页 |
| ·Os02g37190启动子调控元件PlantCARE分析结果 | 第67-69页 |
| ·Os03g01700和Os02g37190启动子调控元件PLACE分析 | 第69-72页 |
| ·Os03g01700启动子-3500bp上存在的特异调控元件及数目(表4.3) | 第71页 |
| ·Os02g27190启动子-3500bp上存在的特异调控元件及数目(表4.4) | 第71-72页 |
| ·Os03g01700和Os02g37190-2000bp左右S449及S98分布 | 第72页 |
| ·Os03g01700和Os02g37190缺失载体瞬时表达 | 第72-73页 |
| ·Os03g01700和Os02g37190缺失载体转化水稻愈伤选择培养Ⅲ阶段GUS染色 | 第73-74页 |
| ·Os03g01700缺失载体转化水稻T0转基因材料GUS分析 | 第74-76页 |
| ·Os02g37190缺失载体转化水稻T0转基因材料阳性材料鉴定及GUS分析 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 、水稻根特异启动子Os03g01700调控OsPT2在根中特异表达 | 第79-96页 |
| ·材料 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-87页 |
| ·水稻根特异超表达OsPT2载体的构建 | 第79-82页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第82页 |
| ·转基因植株PCR阳性检测及转基因拷贝数检测 | 第82-85页 |
| ·DNA提取 | 第82-83页 |
| ·PCR阳性检测 | 第83页 |
| ·转基因Southern检测 | 第83-85页 |
| ·T0转基因植株根特异超表达OsPT2检测 | 第85-86页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第85页 |
| ·实时定量PCR(SYBR-Green Ⅰ) | 第85-86页 |
| ·T0转基因植株有效磷测定 | 第86-87页 |
| ·T1转基因植株正常磷(10ppm)及低磷(0.1ppm)条件下水培实验 | 第87页 |
| ·结果 | 第87-94页 |
| ·水稻根特异超表达OsPT2阳性苗鉴定 | 第87页 |
| ·T0转基因植株根特异超表达OsPT2检测 | 第87-88页 |
| ·T0转基因植株Southern分析 | 第88-89页 |
| ·T0转基因植株有效磷测定 | 第89-90页 |
| ·3P:OsPT2 T1转基因植株生理实验 | 第90-94页 |
| ·3P:OsPT2 T1植株水培30天表型 | 第90-93页 |
| ·3P:OsPT2 T1植株水培30天有效磷测定 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| 第六章 结论和展望 | 第96-98页 |
| ·结论 | 第96-97页 |
| ·展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
