| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-51页 |
| ·蛋白激酶 | 第12-23页 |
| ·蛋白激酶综述 | 第12-13页 |
| ·蛋白激酶的结构与调控方式 | 第13-17页 |
| ·蛋白激酶的催化机制 | 第17-19页 |
| ·蛋白激酶的底物识别 | 第19-21页 |
| ·蛋白激酶的酶动力学研究 | 第21-23页 |
| ·PAK 家族蛋白 | 第23-48页 |
| ·PAK 家族蛋白 | 第23-27页 |
| ·PAK 家族蛋白的功能 | 第27-36页 |
| ·PAK 的底物特异性 | 第36-38页 |
| ·PAK 蛋白的结构特征 | 第38-43页 |
| ·PAK 蛋白的活力调控机制 | 第43-48页 |
| ·本文的研究目的及主要内容 | 第48-51页 |
| 第2章 PAK2 激酶结构域的自激活机制 | 第51-79页 |
| ·引言 | 第51-53页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·蛋白的克隆、表达和纯化 | 第53-54页 |
| ·酶活力分析 | 第54-55页 |
| ·免疫印迹实验 | 第55-56页 |
| ·酶自激活的底物反应动力学分析 | 第56-71页 |
| ·初始体系中混杂有活性酶分子的自激活底物动力学模型 | 第56-62页 |
| ·通过分子内自激活起始的自激活底物反应动力学 | 第62-66页 |
| ·通过分子间自激活起始的自激活底物反应动力学 | 第66-69页 |
| ·不同自激活机制的动力学区分方法 | 第69-71页 |
| ·实验结果 | 第71-77页 |
| ·PAK2 激酶结构域的磷酸化状态检测 | 第71-73页 |
| ·PAK2 激酶结构域的自激活机制 | 第73-75页 |
| ·外源底物对PAK2 激酶结构域的自催化激活的影响 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第3章 受Cdc42 调控的PAK2 自激活机制 | 第79-104页 |
| ·引言 | 第79-80页 |
| ·材料与方法 | 第80-81页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·蛋白的克隆、表达和纯化 | 第80-81页 |
| ·酶活力分析 | 第81页 |
| ·免疫印迹实验 | 第81页 |
| ·配体激活的酶分子间自激活反应的底物反应动力学分析 | 第81-95页 |
| ·初始体系中混杂有活性酶分子的自激活底物反应动力学 | 第82-87页 |
| ·配体结合时通过分子内自激活起始的自激活底物反应动力学 | 第87-91页 |
| ·配体结合时以分子间自激活起始的自激活底物反应动力学 | 第91-93页 |
| ·不同自激活机制的动力学区分方法 | 第93-95页 |
| ·实验结果 | 第95-102页 |
| ·PAK2 的磷酸化状态检测 | 第95-96页 |
| ·动力学实验前期对照实验 | 第96-97页 |
| ·PAK2 的自激活过程是以分子内反应起始的 | 第97-99页 |
| ·活性小G 蛋白与PAK2 的结合能力 | 第99-100页 |
| ·外源底物对 PAK2 的自催化激活的影响 | 第100-102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| 第4章 PAK2 激酶结构域的结构生物学研究 | 第104-126页 |
| ·引言 | 第104-105页 |
| ·材料与方法 | 第105-110页 |
| ·材料 | 第105页 |
| ·蛋白的克隆、表达和纯化 | 第105-106页 |
| ·结晶条件的筛选与优化 | 第106-109页 |
| ·数据收集和处理 | 第109页 |
| ·结构解析及模型修正 | 第109-110页 |
| ·酶活力分析及免疫印迹实验 | 第110页 |
| ·实验结果 | 第110-123页 |
| ·PAK2 激酶结构域片段蛋白的制备和特性 | 第110-113页 |
| ·PAK2 激酶结构域片段蛋白的结晶尝试及结构解析 | 第113-117页 |
| ·磷酸化PAK2-KD 的结构 | 第117-121页 |
| ·保守的 Lys278 位点对 PAK2 活力的影响 | 第121-123页 |
| ·讨论 | 第123-126页 |
| 第5章 PAK1 激酶结构域的结构生物学研究 | 第126-147页 |
| ·引言 | 第126-127页 |
| ·材料与方法 | 第127-128页 |
| ·材料 | 第127页 |
| ·蛋白的克隆、表达和纯化 | 第127页 |
| ·结晶条件的筛选与优化 | 第127页 |
| ·数据收集和处理 | 第127页 |
| ·结构解析及模型修正 | 第127页 |
| ·酶活力分析及免疫印迹实验 | 第127-128页 |
| ·实验结果 | 第128-144页 |
| ·PAK1 激酶结构域片段蛋白的制备和特性 | 第128-130页 |
| ·PAK1 激酶结构域片段蛋白的结晶尝试 | 第130-135页 |
| ·PAK1-KD(K299R)是一个磷酸化的活的激酶 | 第135-136页 |
| ·非磷酸化PAK1-KD 具有两种构象 | 第136-140页 |
| ·非磷酸化PAK1-KD 类似酶-底物复合物 | 第140-144页 |
| ·讨论 | 第144-147页 |
| 第6章 论文总结 | 第147-151页 |
| ·研究总结 | 第147-148页 |
| ·待解决的问题 | 第148-149页 |
| ·前景与展望 | 第149-151页 |
| 参考文献 | 第151-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第166页 |
