| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-27页 |
| ·研究的背景、目的及意义 | 第14-17页 |
| ·MHC I 类分子 | 第14页 |
| ·MHC I 类分子的结构 | 第14-16页 |
| ·重链 | 第14-15页 |
| ·轻链 | 第15-16页 |
| ·MHC I 类分子的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·参与对抗原处理 | 第16页 |
| ·约束免疫细胞间相互作用 | 第16页 |
| ·参与对免疫应答的遗传控制 | 第16-17页 |
| ·诱导自身或同种淋巴细胞反应 | 第17页 |
| ·参与T 细胞分化过程 | 第17页 |
| ·研究的目的与意义 | 第17页 |
| ·国内外标记蛋白方法的研究现状 | 第17-22页 |
| ·荧光蛋白标记 | 第17-18页 |
| ·Tetracysteine tag 标记 | 第18-19页 |
| ·SNAP tag 标记 | 第19-20页 |
| ·Halo Tag 标记 | 第20-22页 |
| ·研究目标、内容、拟解决的关键问题、实验方法和技术路线 | 第22-27页 |
| ·研究目标 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23页 |
| ·拟解决的关键问题 | 第23页 |
| ·研究方法及技术路线 | 第23-27页 |
| 第2章 TCtag 和halotag 特异性标记 MHC I 类分子 | 第27-42页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·主要实验材料 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要实验设备 | 第27-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·表达MHC-I 类分子-FUkbEGFPTCtag 融合蛋白载体的构建 | 第28-32页 |
| ·Bgl II 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2 | 第28-29页 |
| ·酶切片断kbEGFP 的回收 | 第29页 |
| ·BamH I 和 BsrG I 酶切质粒载体FUIEalphaEGFPTCtag | 第29页 |
| ·酶切载体FUTCtag 的回收 | 第29页 |
| ·连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化 | 第30页 |
| ·挑选克隆、摇菌、提质粒 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第31页 |
| ·质粒电泳 | 第31-32页 |
| ·测序鉴定 | 第32页 |
| ·表达MHC-I 类分子-FUkbhalotag 融合蛋白载体的构建 | 第32-35页 |
| ·PCR 扩增halotag 的引物序列设计 | 第32页 |
| ·PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第32-33页 |
| ·Age I 和 BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第33页 |
| ·酶切载体的回收 | 第33-34页 |
| ·Age I 和 BsrG I 酶切FUKY 载体 | 第34页 |
| ·连接 | 第34页 |
| ·连接产物转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第35页 |
| ·DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbEGFPTCtag | 第35-36页 |
| ·表达FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞的建立 | 第36页 |
| ·ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞 | 第36-37页 |
| ·DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第37页 |
| ·表达FUkbhalotag 的DC2.4-FUKY 细胞的建立 | 第37-38页 |
| ·HaloTag(?) TMR 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC2.4-FUKY 细胞系 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-41页 |
| ·FUkbEGFPTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第38-39页 |
| ·鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbEGFPTCtag | 第39页 |
| ·FUkbhalotag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第39页 |
| ·鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotag | 第39-40页 |
| ·ReAsH 标记染色转染FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC2.4-FUKY 细胞 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第3章 TCtag 和halotag 在非APC 细胞中特异性标记MHC I 类分子 | 第42-53页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要实验材料 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要实验设备 | 第42-43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-50页 |
| ·表达MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白载体的构建 | 第43-48页 |
| ·Tetracysteine tag（TCtag）寡聚核苷酸序列的设计 | 第43页 |
| ·合成的两条互补的TCtag 寡具核苷酸序列序列退火 | 第43-44页 |
| ·Age I 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2 | 第44页 |
| ·酶切载体的回收 | 第44-45页 |
| ·连接：退火后的TC tag 与载体连接 | 第45页 |
| ·连接产物转化 | 第45页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| ·Bgl II 和BsrG I 酶切质粒载体pKE2TCtag | 第46页 |
| ·酶切片断kbTCtag 的回收 | 第46页 |
| ·BamH I 和BsrG I 酶切质粒载体FUGW | 第46-47页 |
| ·酶切载体FUGW 的回收 | 第47页 |
| ·连接 | 第47页 |
| ·连接产物转化 | 第47页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第47-48页 |
| ·MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白的表达 | 第48页 |
| ·ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的293FT 细胞 | 第48-49页 |
| ·DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第49-50页 |
| ·稳定表达 FUkbhalotag 的 293FT 细胞的建立 | 第50页 |
| ·HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定293FT 细胞系 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-52页 |
| ·FUkbTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第50-51页 |
| ·鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbTCtag | 第51页 |
| ·ReAsH 标记染色转染FUkbTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的293FT 细胞 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第4章 TCtag 在 APC细胞中非特异性标记 MHC I类分子而halotag在 APC 细胞中特异性标记 MHC I 类分子 | 第53-58页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·主要实验材料 | 第53页 |
| ·主要实验设备 | 第53页 |
| ·主要试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbTCtag | 第54-55页 |
| ·表达FUkbTCtag 的DC2.4 细胞的建立 | 第55页 |
| ·FlAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的稳定DC2.4 细胞系 | 第55页 |
| ·DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第55-56页 |
| ·表达FUkbhalotag 的DC2.4 细胞的建立 | 第56页 |
| ·HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC2.4 细胞系 | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57页 |
| ·FlAsH 标记染色表达FUkbTCtag 的DC2.4 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC2.4 细胞 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第5章 293FT 细胞膜上 MHC I 类分子的表达分布 | 第58-72页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·主要实验材料 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要实验设备 | 第58-59页 |
| ·主要试剂的配制 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-69页 |
| ·表达MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白载体的构建 | 第59-68页 |
| ·PCR 扩增extracelluar-kb 的引物序列设计 | 第59页 |
| ·PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸 | 第59-60页 |
| ·PCR 扩增halotag 的引物序列设计 | 第60页 |
| ·PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第60页 |
| ·PCR 扩增transmembraneous-cytoplasic-kb（TCkb）的引物序列设计 | 第60-61页 |
| ·PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸 | 第61页 |
| ·Hind III 和BamHI 酶切PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸 | 第61-62页 |
| ·酶切载体的回收 | 第62页 |
| ·Hind III 和BamHI 酶切pKE2 载体 | 第62页 |
| ·连接pextracelluarkbEGFP | 第62-63页 |
| ·连接产物转化 | 第63页 |
| ·抽提质粒pextracelluarkbEGFP | 第63页 |
| ·BsrG I 和EcoR I 酶切PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸 | 第63-64页 |
| ·BsrG I 和EcoR I 酶切载体FUGW | 第64页 |
| ·连接FUGWTCkb | 第64页 |
| ·连接产物转化 | 第64-65页 |
| ·抽提质粒FUGWTCkb | 第65页 |
| ·BamH I 和BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第65页 |
| ·BamH I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbEGFP | 第65页 |
| ·连接pextracelluarkbhalotag | 第65-66页 |
| ·连接产物转化 | 第66页 |
| ·抽提质粒pextracelluarkbhalotag | 第66页 |
| ·Age I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbhalotag | 第66-67页 |
| ·Age I 和BsrG I 酶切载体FUGWTCkb | 第67页 |
| ·连接FUkbhalotagout | 第67页 |
| ·连接产物转化 | 第67-68页 |
| ·抽提质粒FUkbhalotagout | 第68页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第68页 |
| ·MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白的表达 | 第68-69页 |
| ·HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-71页 |
| ·FUkbhalotagout 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第69-70页 |
| ·鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotagout | 第70页 |
| ·HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 第6章 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·本研究的技术总结 | 第72-73页 |
| ·本课题的技术创新点 | 第73页 |
| ·本研究的问题与展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-77页 |
| 个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第77页 |
