| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 绪论 | 第11-20页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·植物病害及其防治 | 第11-13页 |
| ·植物病虫灾害的基本特征 | 第11页 |
| ·植物病虫害引发的原因 | 第11页 |
| ·植物病害造成的损失 | 第11-12页 |
| ·植物病害防治现状 | 第12-13页 |
| ·几丁质酶概述 | 第13-15页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第13-14页 |
| ·植物几丁质酶的生物学特性及应用 | 第14-15页 |
| ·二色补血草简介 | 第15-18页 |
| ·二色补血草几丁质酶基因chi31概况 | 第15-16页 |
| ·二色补血草几丁质酶基因chi32概况 | 第16-18页 |
| ·几丁质酶基因chi31及chi32比较 | 第18页 |
| ·本项研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 立枯丝核菌胁迫下chi31及chi32的表达 | 第20-29页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·植物材料及菌株 | 第20页 |
| ·定量PCR引物 | 第20页 |
| ·常用试剂 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-23页 |
| ·材料处理 | 第20-21页 |
| ·立枯丝核菌胁迫下二色补血草根和叶RNA的提取 | 第21页 |
| ·总RNA的消化 | 第21-22页 |
| ·总RNA的反转录 | 第22-23页 |
| ·chi31、chi32的实时定量RT-PCR | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-27页 |
| ·二色补血草总RNA的提取和纯化 | 第23-24页 |
| ·反转录后的PCR检测 | 第24页 |
| ·立枯丝核菌胁迫下根和叶部chi31荧光定量PCR结果 | 第24-25页 |
| ·立枯丝核菌胁迫下根和叶部chi32荧光定量PCR结果 | 第25-26页 |
| ·chi31和chi32荧光定量PCR结果比较 | 第26-27页 |
| ·关于的二色补血草响应立枯丝核菌诱导讨论 | 第27页 |
| ·二色补血草RNA提取方法的讨论 | 第27页 |
| ·几丁质酶基因与抗真菌病害的相关性 | 第27页 |
| ·本章小结 | 第27-29页 |
| 3 几丁质酶基因chi31和chi32原核胞内表达及分析 | 第29-53页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·菌株和载体 | 第29页 |
| ·酶和引物 | 第29页 |
| ·酶活测定试剂 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·原核胞内表达载体pET-chi31in和pET-chi32in的构建及鉴定 | 第31-36页 |
| ·几丁质酶粗酶液的培养与诱导 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第36-37页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第37-38页 |
| ·重组酶粗酶液抗病原真菌的初步研究 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-50页 |
| ·载体与目的基因的双酶切 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的PCR筛选和双酶切鉴定 | 第40-42页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第42-43页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第43-48页 |
| ·重组几丁质酶对不同真菌细胞壁的水解作用 | 第48-50页 |
| ·关于原核胞内表达讨论 | 第50-52页 |
| ·表达的二色补血草几丁质酶大小探讨 | 第50-51页 |
| ·关于几丁质酶的活力测定的方法选择及原则 | 第51页 |
| ·提高重组几丁质酶抗病原能力的讨论 | 第51页 |
| ·重组蛋白CHI31in、CHI32in的生物活性比较的讨论 | 第51页 |
| ·重组蛋白CHI31in、CHI32in降解卵菌细胞壁的讨论 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 4 几丁质酶基因chi31和chi32的原核胞外表达及分析 | 第53-72页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·菌株和载体:与3.1.1相同 | 第53页 |
| ·酶和引物 | 第53页 |
| ·酶活测定试剂:与3.1.3相同 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE试剂:与3.1.4相同 | 第53页 |
| ·培养基:与3.1.6相同 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-58页 |
| ·原核胞外表达载体(pET-chi31ex,pET-chi32ex)的构建及其鉴定 | 第53-57页 |
| ·几丁质酶粗酶液的培养与诱导 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第57-58页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第58页 |
| ·重组酶粗酶液抗病原真菌的初步研究 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-70页 |
| ·载体与目的基因的双酶切 | 第58-60页 |
| ·载大肠杆菌重组质粒的PCR筛选和双酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第61-63页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第63-67页 |
| ·重组几丁质酶对不同真菌细胞壁的水解作用 | 第67-70页 |
| ·关于原核胞外表达的讨论 | 第70-71页 |
| ·表达的二色补血草几丁质酶大小探讨 | 第70页 |
| ·提高重组几丁质酶抗病原能力的讨论 | 第70页 |
| ·重组蛋白CHI31ex、CHI32ex的生物活性比较的讨论 | 第70页 |
| ·重组蛋白CHI31ex、CHI32ex降解卵菌细胞壁的讨论 | 第70页 |
| ·关于胞内重组酶与胞外重组酶差别的讨论 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
