| 第一部分摘要 | 第1-3页 |
| 第一部分Abstract | 第3-4页 |
| 第二部分摘要 | 第4-5页 |
| 第二部分Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一部分 腺病毒介导胰岛素样生长因子1基因对大鼠胰岛β细胞损害的保护性研究(体外实验) | 第12-35页 |
| 第一章 材料与方法 | 第12-22页 |
| ·仪器试剂耗材 | 第12-14页 |
| ·主要仪器 | 第12页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第12-13页 |
| ·常用试剂配制 | 第13-14页 |
| ·目的基因的制备 | 第14-15页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR及产物鉴定 | 第15页 |
| ·RT-PCR扩增产物的纯化 | 第15页 |
| ·腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-rIGF-1的构建 | 第15-17页 |
| ·目的基因及载体pAdTrack-CMV双酶切及回收 | 第15-16页 |
| ·目的基因与载体连接 | 第16页 |
| ·重组质粒的转化 | 第16页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第16-17页 |
| ·在E.coli BJ5183菌中构建重组子 | 第17-18页 |
| ·重组质粒的线性化和去磷酸化 | 第17-18页 |
| ·穿梭质粒与腺病毒骨架载体的共转化 | 第18页 |
| ·重组子的转化 | 第18页 |
| ·重组腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第18-19页 |
| ·重组腺病毒目的基因的表达 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR检测转染RINm-5F细胞目的基因的表达 | 第19页 |
| ·转染细胞目的基因产物表达的检测 | 第19-20页 |
| ·胰岛素释放试验 | 第20页 |
| ·NO测定 | 第20页 |
| ·RINm-5F细胞凋亡的检测 | 第20-21页 |
| ·四甲基偶氮唑盐(MTT)细胞存活率分析 | 第21页 |
| ·统计学处理 | 第21-22页 |
| 第二章 结果 | 第22-27页 |
| ·目的基因RT-PCR产物的鉴定 | 第22页 |
| ·重组腺病毒质粒pAd-rIGF-1的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组腺病毒的包装及滴度测定 | 第23-24页 |
| ·重组腺病毒Ad-rIGF-1感染胰岛细胞株RINm-5F | 第24页 |
| ·RT-PCR检测感染RINm-5F细胞目的基因的表达 | 第24页 |
| ·病毒感染RINm-5F细胞目的蛋白的测定 | 第24页 |
| ·STZ对RINm-5F细胞分泌胰岛素的影响 | 第24-25页 |
| ·培养上清中NO含量测定结果 | 第25页 |
| ·IGF-1对STZ作用大鼠胰岛细胞凋亡的影响 | 第25-26页 |
| ·IGF-1对STZ作用大鼠胰岛细胞存活率的影响 | 第26-27页 |
| 第三章 讨论 | 第27-30页 |
| ·重组腺病毒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组腺病毒对STZ诱导胰岛β细胞损害的影响 | 第28-30页 |
| 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-35页 |
| 第二部分 腺病毒介导胰岛素样生长因子1基因对链脲佐菌素诱发大鼠1型糖尿病的保护性作用(体内实验) | 第35-49页 |
| 第一章 材料与方法 | 第35-41页 |
| ·仪器试剂耗材 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·糖尿病成模药品及检测试剂 | 第35页 |
| ·病理切片与免疫组化试剂及仪器 | 第35-36页 |
| ·ELISA试剂及仪器 | 第36页 |
| ·SD大鼠分组与成模 | 第36-37页 |
| ·大鼠分组 | 第36页 |
| ·重组腺病毒基因接种 | 第36页 |
| ·诱发糖尿病 | 第36页 |
| ·体质量及血糖检测 | 第36-37页 |
| ·大鼠处死及标本留取 | 第37页 |
| ·ELISA试剂盒检测血清IGF-1含量 | 第37页 |
| ·标本与试剂准备 | 第37页 |
| ·检测步骤 | 第37页 |
| ·结果分析 | 第37页 |
| ·ELISA试剂盒检测血清胰岛素含量 | 第37-38页 |
| ·标本与试剂准备 | 第37-38页 |
| ·检测步骤 | 第38页 |
| ·结果分析 | 第38页 |
| ·胰腺病理切片制备、HE染色及免疫组化检测胰腺局部IGF-1表达 | 第38-40页 |
| ·石蜡包埋 | 第38页 |
| ·切片、展片及粘片 | 第38-39页 |
| ·HE染色 | 第39页 |
| ·SABC免疫组化试剂盒检测胰腺局部IGF-1表达 | 第39-40页 |
| ·形态学观察 | 第40页 |
| ·统计学处理 | 第40-41页 |
| 第二章 结果 | 第41-47页 |
| ·大鼠血糖及体质量监测 | 第41-42页 |
| ·STZ用药1周内 | 第41页 |
| ·STZ用药1周后 | 第41-42页 |
| ·大鼠血清IGF-1含量测定 | 第42-43页 |
| ·大鼠血清胰岛素含量测定 | 第43-44页 |
| ·胰岛炎症浸润情况 | 第44-45页 |
| ·免疫组化测胰腺组织中IGF-1含量 | 第45-47页 |
| 第三章 讨论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 综述 | 第53-60页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
