| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 辣椒概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 辣椒作物的种类与分布 | 第11页 |
| 1.1.2 辣椒作物的经济价值 | 第11-12页 |
| 1.1.3 辣椒作物的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.4 辣椒病毒病 | 第12-15页 |
| 1.1.5 辣椒病毒病的危害及其防治 | 第15-16页 |
| 1.2 辣椒脉黄病毒的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.1 辣椒脉黄病毒病的危害 | 第16-17页 |
| 1.2.2 辣椒脉黄病毒基因组结构以及编码蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3 植物病毒运动蛋白研究进展 | 第18-23页 |
| 1.3.1 植物病毒的运动蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.2 运动蛋白的分类 | 第19-21页 |
| 1.3.3 植物病毒MP的作用机理 | 第21-22页 |
| 1.3.4 植物病毒在植物体内的胞间运动形式 | 第22-23页 |
| 1.4 胞间连丝 | 第23页 |
| 1.5 植物病毒与胞间连丝的相互作用 | 第23页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.7 技术与路线 | 第24-25页 |
| 第二章 PeVYVP4基因的克隆、测序和序列分析 | 第25-38页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 材料来源 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器与耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.5 分子生物学软件 | 第26页 |
| 2.2 PeVYVP4基因的扩增 | 第26-33页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.2 辣椒叶片的RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.2.4 RT-PCR的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.5 PCR产物凝胶电泳检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 DNA的胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第31页 |
| 2.2.8 转化反应 | 第31-33页 |
| 2.3 鉴定结果及序列分析 | 第33-36页 |
| 2.3.1 RT-PCR检测结果 | 第33页 |
| 2.3.2 菌落PCR电泳图 | 第33-34页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第34页 |
| 2.3.4 PeVYVP4蛋白功能预测 | 第34-36页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 PeVYVP4蛋白的亚细胞定位 | 第38-56页 |
| 3.1 材料和方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.2 病毒材料 | 第39页 |
| 3.1.3 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.1.4 主要试剂与实验仪器 | 第39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-49页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第39-40页 |
| 3.2.2 利OverLAPPCR构建PeVYVP4的突变体 | 第40-43页 |
| 3.2.3 P4基因片段的扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.4 P4以及2个突变体的Gateway入门载体的构建 | 第44页 |
| 3.2.5 连接转化 | 第44页 |
| 3.2.6 质粒提取 | 第44-45页 |
| 3.2.7 入门载体的线性化 | 第45-46页 |
| 3.2.8 PeVYVP4和2个突变体的植物表达载体的构建 | 第46页 |
| 3.2.9 农杆菌GV3101的转化 | 第46-47页 |
| 3.2.10 农杆菌阳性转化菌鉴定 | 第47页 |
| 3.2.11 注射本氏烟 | 第47-48页 |
| 3.2.12 激光共聚焦显微镜观察 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-55页 |
| 3.3.1 PeVYVP4的2个突变体扩增结果 | 第49-50页 |
| 3.3.2 PeVYVP4和2个突变体连Gateway入门载体 | 第50-51页 |
| 3.3.3 PeVYVP4和2个突变体用Gateway连表达载体 | 第51页 |
| 3.3.4 将3个目的基因转到农杆菌GV3101的检测结果 | 第51-52页 |
| 3.3.5 PeVYVP4蛋白在本氏烟的亚细胞定位 | 第52页 |
| 3.3.6 P4基因的2个突变体对其的亚细胞定位 | 第52-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 PeVYVP4蛋白驱动YFP的胞间运动 | 第56-61页 |
| 4.1 材料和方法 | 第56-57页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第56页 |
| 4.1.3 试剂和仪器 | 第56-57页 |
| 4.2 试验方法 | 第57-58页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第57页 |
| 4.2.2 PeVYVP4基因片段的扩增 | 第57页 |
| 4.2.3 PeVYVP4基因连入门载体和表达载体 | 第57页 |
| 4.2.4 注射农杆菌侵染到本氏烟草 | 第57-58页 |
| 4.2.5 侵染本氏烟的载波片制作 | 第58页 |
| 4.2.6 共聚焦 | 第58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-60页 |
| 4.3.1 P4-YFP的农杆菌菌落PCR鉴定 | 第58页 |
| 4.3.2 P4-YFP的胞间运动 | 第58-59页 |
| 4.3.3 P4-YFP的在不同时间下驱动胞间运动 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 第五章 全文总结及展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录1 本试验所用重要缩写词及中文对照 | 第71-72页 |
| 附录2 本试验所用溶液及培养基的配方 | 第72-73页 |
| 附录3 常用生化试剂及仪器 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简介 | 第76页 |
