| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-13页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一章 何首乌中主要毒性成分筛选及其对L02肝细胞CYP亚酶表达的影响 | 第19-37页 |
| 1.1 前言 | 第19页 |
| 1.2 材料与方法 | 第19-28页 |
| 1.2.1 药品与试剂 | 第19-20页 |
| 1.2.2 仪器与设备 | 第20页 |
| 1.2.3 细胞培养 | 第20-21页 |
| 1.2.4 药物配制 | 第21页 |
| 1.2.5 MTS检测L02细胞活性 | 第21-22页 |
| 1.2.6 乳酸脱氢酶比色法(LDH)检测L02细胞损伤 | 第22页 |
| 1.2.7 1-ABT对细胞活力的影响 | 第22页 |
| 1.2.8 Real Time PCR测定L02细胞CYP450mRNA表达水平 | 第22-24页 |
| 1.2.9 Western-blot检测CYP450蛋白表达的影响 | 第24-27页 |
| 1.2.10 统计学分析 | 第27-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-35页 |
| 1.3.1 何首乌中主要成分对L02细胞活力的影响 | 第28-29页 |
| 1.3.2 大黄素对L02细胞活力的影响 | 第29-30页 |
| 1.3.3 乳酸脱氢酶(LDH)比色法检测L02细胞损伤 | 第30-31页 |
| 1.3.4 1-ABT对L02细胞活力的影响 | 第31页 |
| 1.3.5 大黄素对L02细胞P450酶亚型mRNA表达的影响 | 第31-33页 |
| 1.3.6 大黄素对L02细胞CYP1A1的调节作用 | 第33-35页 |
| 1.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 大黄素通过AhR-CYP1A1通路增强L02肝细胞毒性 | 第37-66页 |
| 2.1 前言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-49页 |
| 2.2.1 药品与试剂 | 第38页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第38页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.4 药物配制 | 第38-39页 |
| 2.2.5 Real Time PCR检测目的基因mRNA表达 | 第39页 |
| 2.2.6 Western-blot检测目的蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 2.2.7 基于AhR配体的大黄素对CYP1A1报告基因检测 | 第40-43页 |
| 2.2.8 基于siRNA干扰检测大黄素对AhR及其下游调控基因的影响 | 第43页 |
| 2.2.9 电泳迁移率实验(EMSA) | 第43-46页 |
| 2.2.10 高内涵检测(HCS) | 第46-47页 |
| 2.2.11 活性氧检测(ROS) | 第47-48页 |
| 2.2.12 JC-1标记检测线粒体膜电位（MMP） | 第48页 |
| 2.2.13 Fluo-4/AM检测细胞内Ca~(2+)浓度 | 第48-49页 |
| 2.2.14 细胞凋亡检测(APO) | 第49页 |
| 2.2.15 统计学分析 | 第49页 |
| 2.3 结果 | 第49-64页 |
| 2.3.1 大黄素对AhR的激活效应 | 第49-50页 |
| 2.3.2 利用siRNA方法敲低AhR | 第50-51页 |
| 2.3.3 AhR敲低前后大黄素对L02细胞内CYP1A1表达的影响 | 第51-52页 |
| 2.3.4 报告基因检测大黄素对AhR转录活性的影响 | 第52-53页 |
| 2.3.5 EMSA检测大黄素对AhR的调节作用 | 第53-54页 |
| 2.3.6 AhR抑制前后大黄素对L02细胞数和形态结构的影响 | 第54-56页 |
| 2.3.7 AhR抑制前后大黄素对线粒体膜电位的影响 | 第56-58页 |
| 2.3.8 AhR抑制前后大黄素对细胞内ROS和GSH的影响 | 第58-60页 |
| 2.3.9 大黄素对L02细胞内Ca~(2+)的影响 | 第60-61页 |
| 2.3.10 大黄素对L02细胞凋亡的影响 | 第61-62页 |
| 2.3.11 大黄素对内质网应激通路相关蛋白的影响 | 第62-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 大黄素对鼠肝脏损伤作用与CYP1A1诱导相关 | 第66-84页 |
| 3.1 前言 | 第66页 |
| 3.2 材料与方法 | 第66-73页 |
| 3.2.1 药品与试剂 | 第66-67页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第67页 |
| 3.2.3 动物与分组 | 第67-68页 |
| 3.2.4 药物配制 | 第68页 |
| 3.2.5 Real Time PCR检测目的基因mRNA表达 | 第68-69页 |
| 3.2.6 Western-blot检测目的蛋白的表达 | 第69页 |
| 3.2.7 大鼠肝微粒体制备 | 第69-70页 |
| 3.2.8 Cocktail探针法测定CYP酶活性 | 第70-73页 |
| 3.2.9 病理切片HE染色分析 | 第73页 |
| 3.2.10 血清生化学分析 | 第73页 |
| 3.2.11 统计学分析 | 第73页 |
| 3.3 结果 | 第73-82页 |
| 3.3.1 大黄素对大鼠肝微粒体CYP450的影响 | 第73-74页 |
| 3.3.2 大黄素对C57小鼠存活率和体重的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.3 大黄素对C57小鼠生理活动和脏器宏观形态的影响 | 第75-77页 |
| 3.3.4 大黄素对C57小鼠各脏器系数的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.5 大黄素对C57小鼠肝功能生化指标的影响 | 第78-79页 |
| 3.3.6 大黄素对C57小鼠病理指标的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.7 大黄素对C57小鼠肝毒性相关蛋白的影响 | 第80-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-84页 |
| 第四章 结论与展望 | 第84-88页 |
| 4.1 结论 | 第84-87页 |
| 1.大黄素通过激活AhR受体诱导CYP1A1 | 第84页 |
| 2.大黄素所致的肝损伤与细胞内长期的氧化应激和内质网应激有关 | 第84-85页 |
| 3.AhR-CYP1A1通路在大黄素引起的肝毒性中起关键作用 | 第85-87页 |
| 4.2 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第94页 |
