| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 鱼类转基因研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1.1 鱼类转基因技术 | 第12-14页 |
| 1.1.2 鱼类转基因效果 | 第14-20页 |
| 1.1.2.1 促生长效果 | 第14-17页 |
| 1.1.2.2 抗病性 | 第17页 |
| 1.1.2.3 抗冻性 | 第17-18页 |
| 1.1.2.4 转基因的多效性 | 第18-20页 |
| 1.1.3 转GH基因鱼制作需考虑的问题 | 第20-21页 |
| 1.2 转基因鱼生态安全研究进展 | 第21-25页 |
| 1.2.1 转基因鱼的生态安全 | 第21页 |
| 1.2.2 应对转基因鱼生态安全的方法 | 第21-25页 |
| 第2章 黄颡鱼转基因导入方法的研究 | 第25-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-31页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26-27页 |
| 2.1.2 黄颡鱼基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.1.3 黄颡鱼β-actin启动子的分离 | 第27-29页 |
| 2.1.4 黄颡鱼β-actin启动子驱动黄色荧光蛋白报告基因表达载体的构建 | 第29页 |
| 2.1.5 斑马鱼受精卵采集 | 第29页 |
| 2.1.6 黄颡鱼β-actin启动子活性的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.1.7 黄颡鱼精液和受精卵采集 | 第30页 |
| 2.1.8 精子载体法转Tg (beta-actin:eYFP)试验 | 第30页 |
| 2.1.9 显微注射法转Tg (beta-actin:eYFP)试验 | 第30-31页 |
| 2.2 结果 | 第31-36页 |
| 2.2.1 黄颡鱼β-actin启动子序列 | 第31页 |
| 2.2.2 黄颡鱼β-actin启动子驱动的eYFP报告基因在斑马鱼胚胎中表达 | 第31-34页 |
| 2.2.3 精子载体法转Tg(beta-actin:eYFP)结果 | 第34页 |
| 2.2.4 显微注射法转Tg(beta-actin:eYFP)结果 | 第34-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-38页 |
| 第3章 稳定表达黄色荧光蛋白转基因黄颡鱼的研究 | 第38-51页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-42页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 3.1.2 黄颡鱼受精卵的获得 | 第39页 |
| 3.1.3 转黄颡鱼β-actin启动子驱动报告基因的斑马鱼的制作 | 第39-41页 |
| 3.1.4 转Tg(beta-actin:eYFP)基因黄颡鱼制作 | 第41-42页 |
| 3.2 结果 | 第42-48页 |
| 3.2.1 获得黄颡鱼β-actin启动子驱动mCherry报告基因转基因斑马鱼 | 第42-44页 |
| 3.2.2 获得黄颡鱼β-actin启动子驱动eYFP报告基因转基因黄颡鱼 | 第44-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-51页 |
| 第4章 “全鱼”转生长激素基因黄颡鱼的制作 | 第51-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第52-59页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第52页 |
| 4.1.2 黄颡鱼生长激素编码序列的克隆 | 第52-53页 |
| 4.1.3 黄颡鱼生长激素与其它动物生长激素的同源性比对及系统进化树构建 | 第53-54页 |
| 4.1.4 黄颡鱼生长激素3'-非翻译区序列的克隆 | 第54-55页 |
| 4.1.5 “全鱼”转生长激素基因构件的制备 | 第55-56页 |
| 4.1.6 黄颡鱼人工繁殖和受精卵获得 | 第56页 |
| 4.1.7 “全鱼”转生长激素基因黄颡鱼首建者的制作 | 第56-57页 |
| 4.1.8 转入目的基因检测 | 第57-58页 |
| 4.1.9 “全鱼”转生长激素基因黄颡鱼的筛选 | 第58-59页 |
| 4.2 结果 | 第59-66页 |
| 4.2.1 黄颡鱼生长激素蛋白质序列 | 第59-61页 |
| 4.2.2 “全鱼”转生长激素基因构件 | 第61-63页 |
| 4.2.3 获得“全鱼”转生长激素基因首建者 | 第63-64页 |
| 4.2.4 获得“全鱼”转生长激素基因黄颡鱼 | 第64-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-69页 |
| 第5章 GNRH1与GNRH2基因敲除黄颡鱼的研究 | 第69-87页 |
| 5.1 材料与方法 | 第70-75页 |
| 5.1.1 黄颡鱼人工授精 | 第70页 |
| 5.1.2 黄颡鱼gnrh基因的克隆 | 第70-72页 |
| 5.1.3 敲除黄颡鱼gnrh1与gnrh2的sgRNA的设计及合成 | 第72-73页 |
| 5.1.4 Cas9 mRNA的体外合成及sgRNA活性鉴定 | 第73-74页 |
| 5.1.5 黄颡鱼gnrh1和gnrh2基因敲除初建者的建立及后代突变体筛选 | 第74-75页 |
| 5.2 结果 | 第75-84页 |
| 5.2.1 黄颡鱼gnrh1和gnrh2基因的克隆 | 第75-76页 |
| 5.2.2 识别gnrh1和gnrh2靶目标序列的sgRNA活性的确定 | 第76-78页 |
| 5.2.3 黄颡鱼gnrh1和gnrh2基因单敲及双敲除突变体的获得 | 第78-84页 |
| 5.3 讨论 | 第84-87页 |
| 第6章 结论 | 第87-89页 |
| 6.1 结论 | 第87-88页 |
| 6.2 展望 | 第88页 |
| 6.3 创新点 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-106页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第106-107页 |
| 一、发表论文 | 第106页 |
| 二、获奖 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
