| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 棉籽油研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.1 棉花油酯的遗传控制 | 第15页 |
| 1.1.2 棉籽油酯的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.1.3 棉籽油酯组分与基因的关系 | 第16页 |
| 1.2 Δ12脂肪酸去饱和酶 | 第16-20页 |
| 1.2.1 FAD2的概念 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Δ12脂肪酸去饱和酶的结构及特性 | 第17-18页 |
| 1.2.3 Δ2脂肪酸去饱和酶系统进化分析 | 第18页 |
| 1.2.4 脂肪酸去饱和酶的功能 | 第18-20页 |
| 1.3 不饱和脂肪酸的合成途径 | 第20-21页 |
| 1.4 Δ12去饱和酶的生理学功能 | 第21-23页 |
| 1.4.1 对生物体脂肪酸含量的影响 | 第21-22页 |
| 1.4.2 对植物生理与农艺学性状的影响 | 第22-23页 |
| 1.5 Δ12脂肪酸去饱和酶基因的结构特点 | 第23-24页 |
| 1.6 Δ12去饱和酶基因家族 | 第24-26页 |
| 1.7 Gateway克隆技术 | 第26页 |
| 1.8 研究前景 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 常用试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 感受态菌株 | 第28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 拟南芥DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 棉花基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 拟南芥RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.4 棉花RNA提取 | 第30页 |
| 2.2.5 制备RNA的完整性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.6 RNA反转录为cDNA | 第31页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.3 FAD2基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.1 GhFAD2-1、GhFAD2-2、GhFAD2-3和GhFAD2-4基因克隆 | 第32页 |
| 2.3.2 GhFAD2-1/2/3/4基因生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.3.3 GhFAD2-1、GhFAD2-2、GhFAD2-3和GhFAD2-4基因qRT-PCR | 第32-33页 |
| 2.4 GhFAD2-1表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 2.4.1 GhFAD2-1基因克隆 | 第33页 |
| 2.4.2 连接转化pGEMTMT-Easycloning载体 | 第33页 |
| 2.4.3 连接产物热激转化大肠杆菌 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组质粒的提取和验证 | 第34-35页 |
| 2.4.5 构建植物表达载体 | 第35-36页 |
| 2.5 植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第36-37页 |
| 2.5.1 农杆菌感受态的制备 | 第36页 |
| 2.5.2 农杆菌的电击转化 | 第36-37页 |
| 2.6 拟南芥遗传转化 | 第37-38页 |
| 2.6.1 转化材料准备 | 第37页 |
| 2.6.2 侵染菌体扩繁 | 第37页 |
| 2.6.3 拟南芥遗传转化 | 第37页 |
| 2.6.4 转化拟南芥的筛选 | 第37-38页 |
| 2.6.5 GC-MS法测定拟南芥种子各脂肪酸组分含量 | 第38页 |
| 2.6.6 拟南芥生理生化统计分析 | 第38页 |
| 2.7 棉花的遗传转化 | 第38-40页 |
| 2.7.1 无菌下胚轴准备 | 第38-39页 |
| 2.7.2 菌液的扩繁 | 第39页 |
| 2.7.3 胚性愈伤诱导及筛选 | 第39页 |
| 2.7.4 组培获得再生苗 | 第39页 |
| 2.7.5 抗性棉花的PCR验证 | 第39页 |
| 2.7.6 转化棉花叶片的渗透性实验 | 第39-40页 |
| 2.8 高油份陆地棉材料的筛选及脂肪酸组分分析 | 第40-41页 |
| 2.8.1 棉籽高油分材料筛选 | 第40页 |
| 2.8.2 棉籽油脂提取 | 第40页 |
| 2.8.3 GC-MS气相色谱-质谱联用仪分析脂肪酸组分 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-66页 |
| 3.1 GhFAD2基因的克隆与表达分析 | 第41-47页 |
| 3.1.1 GhFAD2基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.1.2 GhFAD2-1/2/3/4基因的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.1.3 GhFAD2-1/2/3/4基因不同组织表达分析 | 第46-47页 |
| 3.2 GhFAD2-1在种子脂肪酸合成中的功能分析 | 第47-52页 |
| 3.2.1 棉籽油脂提取 | 第47页 |
| 3.2.2 脂肪酸组成成分分析 | 第47-50页 |
| 3.2.3 GhFAD2-1与种子含油量相关性 | 第50-52页 |
| 3.3 GhFAD2-1的克隆与植物表达载体的构建 | 第52-56页 |
| 3.3.1 GhFAD2-1的克隆 | 第52-53页 |
| 3.3.2 植物表达载体的构建 | 第53-55页 |
| 3.3.3 表达载体pBI121-GhFAD2-1和pANDA35HK-GhFAD2-1转化农杆菌 | 第55-56页 |
| 3.4 拟南芥遗传转化及功能分析 | 第56-62页 |
| 3.4.1 拟南芥的遗传转化 | 第56-57页 |
| 3.4.2 转基因拟南芥的阳性植株鉴定 | 第57-58页 |
| 3.4.3 拟南芥种子脂肪酸含量的测定 | 第58-60页 |
| 3.4.4 GhFAD2-1转化拟南芥其它农艺性状统计分析 | 第60-61页 |
| 3.4.5 GhFAD2-1转化拟南芥叶片渗透性分析 | 第61-62页 |
| 3.5 棉花遗传转化及功能初步分析 | 第62-66页 |
| 3.5.1 pBI121-GhFAD2-1和35HK-GhFAD2-1转化棉花 | 第62-63页 |
| 3.5.2 抗性棉花胚性愈伤的PCR检测 | 第63-64页 |
| 3.5.3 转化GhFAD2-1棉花叶片渗透性分析 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-68页 |
| 4.1 GhFAD2基因克隆及时空表达 | 第66页 |
| 4.2 GhFAD2-1基因与脂肪酸代谢 | 第66-67页 |
| 4.3 转化GhFAD2-1基因植株功能分析 | 第67-68页 |
| 第五章 实验总结与研究展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
