| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第8-10页 |
| 1.1.1 脊髓灰质炎和脊髓灰质炎病毒 | 第8-9页 |
| 1.1.2 脊髓灰质炎疫苗和减毒活疫苗质控 | 第9-10页 |
| 1.2 假病毒颗粒及其相关理论的发展概况 | 第10-11页 |
| 1.3 TA克隆 | 第11页 |
| 1.4 实时荧光定量聚合酶链式反应 | 第11-12页 |
| 1.5 本文的主要研究内容 | 第12页 |
| 1.6 本文的技术路线 | 第12-14页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第14-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-22页 |
| 2.1.1 病毒株、菌种、细胞、国家标准品 | 第14页 |
| 2.1.2 载体 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要试剂及其配制 | 第16-22页 |
| 2.1.5 设计软件和分析软件 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-38页 |
| 2.2.1 构建重组质粒 | 第22-30页 |
| 2.2.2 制备假病毒颗粒 | 第30-31页 |
| 2.2.3 western blotting和蛋白质显色 | 第31-34页 |
| 2.2.4 病毒滴度测定 | 第34页 |
| 2.2.5 实时荧光定量聚合酶链式反应 | 第34-37页 |
| 2.2.6 假病毒颗粒对RNase耐受的检验 | 第37-38页 |
| 第3章 构建重组质粒和诱导假病毒颗粒的表达 | 第38-48页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 特异性扩增脊髓灰质炎病毒目的片段 | 第38-39页 |
| 3.3 构建重组质粒 | 第39-44页 |
| 3.3.1 中间重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定与全长测序 | 第40-44页 |
| 3.3.3 重组菌株保种 | 第44页 |
| 3.4 诱导条件 | 第44-46页 |
| 3.4.1 诱导剂终浓度与诱导表达丰度的关系 | 第44-45页 |
| 3.4.2 诱导时间与诱导表达丰度的关系 | 第45-46页 |
| 3.5 假病毒颗粒粗提液的制备 | 第46页 |
| 3.6 本章小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 假病毒颗粒的定性检测 | 第48-54页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 假病毒颗粒的蛋白质水平定性检测 | 第48-52页 |
| 4.2.1 蛋白质免疫印迹实验及其它染色实验 | 第48-49页 |
| 4.2.2 假病毒颗粒的形态学观察 | 第49-52页 |
| 4.3 假病毒颗粒的核酸水平定性检测 | 第52-53页 |
| 4.3.1 假病毒颗粒的核糖核酸酶耐受 | 第52页 |
| 4.3.2 假病毒颗粒纯化后的溴化乙锭染色 | 第52-53页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第53-54页 |
| 第5章 假病毒颗粒的定量检测与适用 | 第54-62页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 实时荧光定量PCR测定假病毒颗粒拷贝数 | 第54-58页 |
| 5.3 脊髓灰质炎病毒株国家标准品的拷贝数测定 | 第58-59页 |
| 5.4 脊髓灰质炎病毒株国家标准品的滴度测定 | 第59页 |
| 5.5 温度敏感性试验 | 第59-60页 |
| 5.6 假病毒颗粒的型特异性分析 | 第60-61页 |
| 5.7 本章小结与讨论 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-76页 |