| 摘要 | 第1-17页 |
| Abstract | 第17-23页 |
| 英文缩写表 | 第23-25页 |
| 绪言 | 第25-28页 |
| 第一部分 MAPCs/EPCs 性组织工程化静脉瓣的构建 | 第28-78页 |
| 一 前言 | 第28-29页 |
| 二 试剂和仪器设备 | 第29-32页 |
| （一） 试剂 | 第29-31页 |
| （二） 仪器设备 | 第31-32页 |
| 三 方法 | 第32-47页 |
| （一） 实验动物来源与麻醉 | 第32页 |
| （二） 绵羊脱细胞静脉瓣支架材料的制备 | 第32-34页 |
| 1、绵羊带瓣静脉脱细胞方法 | 第32页 |
| 2、绵羊脱细胞静脉瓣支架材料的检测 | 第32-34页 |
| （三） 绵羊骨髓MAPC 的分离、培养、鉴定 | 第34-38页 |
| 1、细胞的分离、纯化 | 第34-35页 |
| 2、细胞的传代扩增培养 | 第35页 |
| 3、细胞生长曲线绘制 | 第35页 |
| 4、流式细胞技术检测 | 第35页 |
| 5、细胞表面标志免疫荧光检测 | 第35-36页 |
| 6. RT-PCR 检测 | 第36-38页 |
| 7、细胞超微结构分析 | 第38页 |
| 8、细胞Hohest 标记 | 第38页 |
| （四） 绵羊骨髓EPC 的分离、培养、鉴定 | 第38-43页 |
| 1、细胞的分离、纯化 | 第39页 |
| 2、分选细胞的扩增培养 | 第39-40页 |
| 3、细胞生长曲线绘制 | 第40页 |
| 4、流式细胞技术检测 | 第40页 |
| 5、细胞表面标志的免疫荧光检测 | 第40-41页 |
| 6. RT-PCR 检测 | 第41-43页 |
| 7、细胞的超微结构检测 | 第43页 |
| 8. PKH26 标记EPC | 第43页 |
| （五） 绵羊MAPCs/EPCs 性组织工程化静脉瓣的体外构建 | 第43-47页 |
| 1、组织工程化静脉瓣的构建 | 第44-45页 |
| 2. MAPCs/EPCs 性组织工程化静脉瓣的大体观察 | 第45页 |
| 3. H-E 染色检测 | 第45页 |
| 4、胶原纤维、弹力纤维染色（Van Gieson V.G 染色法） | 第45-46页 |
| 5、扫描电镜检测 | 第46页 |
| 6、透射电镜观察 | 第46页 |
| 7、生物力学检测 | 第46页 |
| 8、免疫组织化学染色 | 第46-47页 |
| 9、种子细胞在支架材料上追踪 | 第47页 |
| 四 结果 | 第47-71页 |
| （一） 绵羊脱细胞带瓣静脉支架的相关特性 | 第47-52页 |
| 1、大体观察 | 第47-49页 |
| 2. H-E 染色 | 第49页 |
| 3、胶原纤维、弹力纤维染色 | 第49-50页 |
| 4、透射电镜 | 第50页 |
| 5、扫描电镜 | 第50-51页 |
| 6、力学特性 | 第51-52页 |
| （二） MAPC 的形态与相关生物学特性 | 第52-58页 |
| 1、全骨髓原代培养 | 第52-53页 |
| 2. CD45~-细胞分选与培养 | 第53-54页 |
| 3、细胞传代培养 | 第54页 |
| 4、细胞生长曲线 | 第54-55页 |
| 5、流式细胞技术检测 | 第55-56页 |
| 6、细胞表面标志的免疫荧光检测 | 第56页 |
| 7、细胞的超微结构 | 第56-57页 |
| 8、细胞的RT-PCR 检测 | 第57-58页 |
| 9. Hochest 标记细胞 | 第58页 |
| （三） EPC 的形态与相关生物学特性 | 第58-64页 |
| 1、全骨髓原代培养 | 第58-59页 |
| 2. CD133~+细胞培养 | 第59页 |
| 3、细胞传代培养 | 第59-60页 |
| 4. CD133~+细胞生长曲线 | 第60页 |
| 5、流式细胞技术检测 | 第60-61页 |
| 6、细胞表面标志的免疫荧光检测 | 第61-62页 |
| 7、细胞的超微结构 | 第62-63页 |
| 8. RT-PCR 检测 | 第63页 |
| 9、细胞吞噬功能 | 第63-64页 |
| 10. PKH26 标记细胞 | 第64页 |
| （四） 绵羊MAPCs/EPCs 性组织工程化静脉瓣的相关特性 | 第64-71页 |
| 1、体外构建组织工程化静脉瓣大体观察 | 第65页 |
| 2. H-E 染色 | 第65-66页 |
| 3、胶原纤维、弹力纤维染色 | 第66页 |
| 4、透射电镜检测 | 第66-67页 |
| 5、扫描电镜检测 | 第67-68页 |
| 6、生物力学检测结果 | 第68-69页 |
| 7、免疫组织化学染色 | 第69-70页 |
| 8、种子细胞在支架上迁移 | 第70-71页 |
| 五 讨论 | 第71-76页 |
| （一） MAPC 和EPC 是组织工程化静脉瓣理想的种子细胞 | 第71-73页 |
| 1. MAPC 的生物学特性 | 第71页 |
| 2. EPC 的生物学特性 | 第71-72页 |
| 3. MAPC 向平滑肌细胞诱导分化的优越性 | 第72页 |
| 4. EPC 向内皮细胞诱导分化的优越性 | 第72页 |
| 5. MAPC 和EPC 是组织工程化静脉瓣理想的种子细胞 | 第72-73页 |
| （二） 同种异体脱细胞材料是组织工程化静脉瓣理想的支架 | 第73-74页 |
| 1、瓣膜支架的种类 | 第73页 |
| 2、静脉瓣支架特点 | 第73页 |
| 3、脱细胞支架的特性 | 第73-74页 |
| 4、同种异体脱细胞材料是组织工程化静脉瓣理想的支架 | 第74页 |
| （三） 绵羊MAPCs/EPCs 组织工程化静脉瓣的成功构建 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
| 第二部分 MAPCs/EPCs 性组织工程化静脉瓣的在体研究 | 第78-110页 |
| 一 前言 | 第78-79页 |
| 二 试剂和仪器设备 | 第79-81页 |
| （一） 试剂 | 第79-80页 |
| （二） 仪器设备 | 第80-81页 |
| 三 方法 | 第81-84页 |
| （一） 实验动物与移植 | 第81-82页 |
| 1、实验动物分组 | 第81页 |
| 2、手术移植 | 第81-82页 |
| （二） 体内效用性研究 | 第82页 |
| 1、彩色超声检查 | 第82页 |
| 2、小动物显微超声成像 | 第82页 |
| 3、数字减影血管造影（DSA）检查 | 第82页 |
| （三） 标本获取、形态学观察 | 第82-83页 |
| 1、大体观察 | 第82-83页 |
| 2、显微镜下静脉瓣观察 | 第83页 |
| 3、静脉瓣扫描电镜观察 | 第83页 |
| （四） 组织学检测 | 第83-84页 |
| 1. H-E 染色 | 第83页 |
| 2、免疫组织化学染色 | 第83-84页 |
| 四 结果 | 第84-103页 |
| （一） 移植和动物大体观测 | 第84-85页 |
| （二） 体内效用性观察 | 第85-91页 |
| 1、彩色超声多普勒检查 | 第85-88页 |
| 2、小动物显微超声成像 | 第88-90页 |
| 3、数字减影血管造影（DSA）检查 | 第90-91页 |
| （三） 取材后形态学观察 | 第91-96页 |
| 1、大体观察 | 第91-94页 |
| 2、显微镜下静脉瓣观察 | 第94-95页 |
| 3、扫描电镜观察 | 第95-96页 |
| （四） 组织学检测 | 第96-103页 |
| 1. H-E 染色观察 | 第96-98页 |
| 2、免疫组织化学染色 | 第98-103页 |
| 五 讨论 | 第103-108页 |
| （一） 组织工程化静脉瓣移植的在体检测 | 第103-105页 |
| 1、瓣膜功能研究的现状 | 第103页 |
| 2、彩色多谱勒超声在静脉瓣功能研究中的应用 | 第103页 |
| 3、小动物超声在静脉瓣功能研究中的应用 | 第103-104页 |
| 4、数字减影血管造影在静脉瓣功能研究中的应用 | 第104-105页 |
| （二） 组织工程化静脉瓣体内形态学变化规律 | 第105-106页 |
| 1、组织工程化静脉瓣体内形态学变化的研究状况 | 第105页 |
| 2、组织工程化静脉瓣体内形态学变化规律 | 第105页 |
| 3、组织工程化静脉瓣体内长周期瓣膜增厚的可能机制 | 第105-106页 |
| （三） 组织工程化静脉瓣种子细胞的演变规律 | 第106-107页 |
| 1、干细胞体内演变的影响因素 | 第106页 |
| 2、移植干细胞体内演变的一般规律 | 第106-107页 |
| 3、组织工程化静脉瓣种子细胞的体内演变规律 | 第107页 |
| （四） 组织工程化静脉瓣研究展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-110页 |
| 全文小结 | 第110页 |
| 本课题的创新点 | 第110页 |
| 本课题的意义 | 第110-111页 |
| 文献综述 | 第111-115页 |
| 在读期间发表论文、申请基金和奖励 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
