| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 家蚕简介 | 第10页 |
| 1.2 内参基因的研究现状 | 第10-13页 |
| 1.2.1 常用的内参基因 | 第10-13页 |
| 1.2.2 内参基因的选择 | 第13页 |
| 1.3 内参蛋白 | 第13页 |
| 1.4 蛋白质印迹 | 第13-14页 |
| 1.5 研究的主要内容及研究意义 | 第14-16页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第14页 |
| 1.5.3 研究意义 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.1 基本材料 | 第16页 |
| 2.1.2 载体构建相关试剂 | 第16页 |
| 2.2 主要试剂的配制方法 | 第16-19页 |
| 2.2.4 蛋白免疫印记常用溶液配制 | 第18页 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附剂测定ELISA试剂 | 第18页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE蛋白胶电泳步骤 | 第18-19页 |
| 2.3 实验仪器及设备 | 第19-20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.4.1 特异性引物的稀释 | 第20页 |
| 2.4.2 组织解剖以及总RNA提取方法 | 第20-21页 |
| 2.4.3 组织总蛋白提取方法 | 第21页 |
| 2.4.4 细胞总蛋白的提取 | 第21-22页 |
| 2.4.5 感受态的制备 | 第22页 |
| 2.4.6 SDS-PAGE蛋白胶的制备 | 第22-23页 |
| 2.4.7 蛋白免疫印迹 | 第23-24页 |
| 2.4.8 ELISA酶联免疫吸附剂测定 | 第24-25页 |
| 2.5 昆虫细胞培养基本操作 | 第25-27页 |
| 2.5.1 细胞培养基的配置 | 第25-26页 |
| 2.5.2 细胞的复苏 | 第26页 |
| 2.5.3 细胞的培养 | 第26页 |
| 2.5.4 细胞传代 | 第26页 |
| 2.5.5 细胞的冻存 | 第26-27页 |
| 2.6 家蚕内参基因的克隆表达及载体构建 | 第27-32页 |
| 2.6.1 gapdh、actin、tubulin内参基因的引物设计及合成 | 第27页 |
| 2.6.2 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.6.3 PCR扩增目的片段及纯化 | 第28-29页 |
| 2.6.4 目的基因的纯化 | 第29页 |
| 2.6.5 目的片段与载体连接进行蓝白斑筛选 | 第29-30页 |
| 2.6.6 酶切鉴定及测序验证 | 第30-31页 |
| 2.6.7 目的基因与表达载体连接 | 第31页 |
| 2.6.8 载体的构建和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7 重组蛋白的表达和纯化 | 第32-35页 |
| 2.7.1 蛋白的表达 | 第32-34页 |
| 2.7.2 包涵体蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.8 多克隆抗体的制备 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-47页 |
| 3.1 家蚕内参基因克隆与载体构建 | 第36-37页 |
| 3.1.1 家蚕内参基因克隆 | 第36页 |
| 3.1.2 gapdh、actin、tubulin基因表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2 GAPDH、ACTIN、TUBULIN蛋白的表达和纯化 | 第37-47页 |
| 3.2.1 GAPDH、ACTIN、TUBULIN蛋白的原核表达 | 第37-39页 |
| 3.2.2 GAPDH、ACTIN、TUBULIN蛋白切胶纯化 | 第39页 |
| 3.2.3 内参蛋白多克隆抗体的制备与检测 | 第39-40页 |
| 3.2.4 内参蛋白多克隆抗体效价检测 | 第40-43页 |
| 3.2.5 内参蛋白多克隆抗体在家蚕及不同物种的特异性检测 | 第43-45页 |
| 3.2.6 制备的多克隆抗体与商品化多克隆抗体的比较 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第47-49页 |
| 4.1 讨论 | 第47-48页 |
| 4.2 结论 | 第48-49页 |
| 第五章 全文总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-64页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
