| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 植物抗病研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物的诱导防卫系统 | 第13-14页 |
| 1.1.1.1 植物过敏反应 | 第13页 |
| 1.1.1.2 系统获得性抗性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 R 基因的结构和功能 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 植物抗病的“基因对基因”假说 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 R 基因产物的保守区 | 第15页 |
| 1.1.2.3 R 基因的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 植物抗病的信号传导 | 第16-17页 |
| 1.1.3.1 活性氧 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 NO | 第17页 |
| 1.2 马铃薯晚疫病研究现状 | 第17-20页 |
| 1.2.1 马铃薯晚疫病及其危害 | 第17-18页 |
| 1.2.2 马铃薯致病菌 | 第18页 |
| 1.2.3 致病疫霉的生活史 | 第18-19页 |
| 1.2.4 致病疫霉的传播途径 | 第19页 |
| 1.2.5 马铃薯晚疫病抗病育种研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 dirigent 蛋白质研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.1 木质素与木酚素 | 第20-21页 |
| 1.3.2 dirigent 蛋白质 | 第21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-38页 |
| 2.1 主要实验材料及溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要菌种与试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.4 缓冲液及培养基配制 | 第23-24页 |
| 2.2 常规的实验操作 | 第24-26页 |
| 2.2.1 用 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.2 大肠杆菌的化学转化 | 第25页 |
| 2.2.3 质粒 DNA 的小量提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 电转化感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.5 感受态细胞的电击转化 | 第26页 |
| 2.3 基因部分片段的获得 | 第26-27页 |
| 2.3.1 引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.3.2 基因片段的克隆 | 第27页 |
| 2.3.3 重组克隆的筛选 | 第27页 |
| 2.4 基因 5′末端的获得 | 第27-28页 |
| 2.4.1 引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.4.2 基因 5′末端序列的克隆 | 第28页 |
| 2.4.3 重组克隆的筛选 | 第28页 |
| 2.5 基因 3′末端的获得 | 第28-29页 |
| 2.5.1 引物的设计 | 第28页 |
| 2.5.2 基因 3′末端序列的克隆 | 第28-29页 |
| 2.5.3 重组克隆的筛选 | 第29页 |
| 2.6 基因全长序列的获得 | 第29-31页 |
| 2.6.1 引物的设计 | 第29页 |
| 2.6.2 全长基因序列的克隆 | 第29-31页 |
| 2.6.2.1 利用重叠片段获得全长基因的原理 | 第29页 |
| 2.6.2.2 StDIR1 全长片段 PCR | 第29页 |
| 2.6.2.3 StDIR2 全长片段 PCR | 第29-31页 |
| 2.6.2.4 全长片段的转化 | 第31页 |
| 2.6.3 重组克隆的筛选 | 第31页 |
| 2.7 StDIR1 和 StDIR2 基因序列的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.8 StDIR1 和 StDIR2 基因的诱导表达分析 | 第31-32页 |
| 2.8.1 材料的处理 | 第31-32页 |
| 2.8.2 总 RNA 提取及 cDNA 第一链的合成 | 第32页 |
| 2.8.3 马铃薯内参基因 β-Actin 的 PCR 扩增 | 第32页 |
| 2.8.4 StDIR1 基因的半定量 RT-PCR 扩增 | 第32页 |
| 2.8.5 StDIR2 基因的半定量 RT-PCR 扩增 | 第32页 |
| 2.9 切割损伤对 StDIR1 和 StDIR2 基因诱导分析的影响 | 第32-33页 |
| 2.9.1 材料的处理 | 第33页 |
| 2.9.2 StDIR1 和 StDIR2 基因的半定量 RT-PCR 分析 | 第33页 |
| 2.10 StDIR1 基因的组织表达特异性分析 | 第33页 |
| 2.10.1 材料的处理 | 第33页 |
| 2.10.2 StDIR1 基因的半定量 RT-PCR 扩增 | 第33页 |
| 2.11 StDIR1 与 StDIR2 基因 GFP-融合蛋白表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.11.1 载体构建原理 | 第33页 |
| 2.11.2 引物的合成 | 第33-34页 |
| 2.11.3 载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.12 StDIR1 基因正义表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.12.1 载体构建原理 | 第35页 |
| 2.12.2 载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.13 StDIR1 基因反义表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.13.1 载体构建原理 | 第36-37页 |
| 2.13.2 载体的构建 | 第37-38页 |
| 第3章 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 StDIR1 和 StDIR2 基因全长序列的获得与分析 | 第38-48页 |
| 3.1.1 StDIR1 基因的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.1.2 StDIR2 基因的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.1.3 dirigent 蛋白质的同源比对分析 | 第42-45页 |
| 3.1.4 dirigent 蛋白质的系统进化分析 | 第45-48页 |
| 3.2 Dirigent 基因的诱导表达分析 | 第48-49页 |
| 3.2.1 StDIR1 基因的诱导表达分析 | 第48-49页 |
| 3.2.2 StDIR2 基因的诱导表达分析 | 第49页 |
| 3.3 切割损伤对 StDIR1 和 StDIR2 的诱导影响分析 | 第49-50页 |
| 3.4 StDIR1 基因的组织表达特异性分析 | 第50-51页 |
| 3.5 Dirigent 基因真核表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.5.1 StDIR1 和 StDIR2 基因 GFP-融合蛋白表达载体构建 | 第51-52页 |
| 3.5.2 StDIR1 基因正义和反义植物表达载体构建 | 第52-53页 |
| 第4章 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 重叠延伸法扩增全长基因 | 第53页 |
| 4.2 半定量 RT-PCR | 第53-54页 |
| 4.3 真核表达载体的构建 | 第54页 |
| 4.4 dirigent 基因的发现和功能 | 第54-55页 |
| 4.5 H_2O_2和 NO 信号分子在植物抗病过程中的作用 | 第55-56页 |
| 4.6 木质素和木酚素 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第65页 |
