| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 枯草芽孢杆菌调控元件及表达系统研究进展 | 第13-31页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌的表达系统概述 | 第13-15页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌载体 | 第15-19页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌的质粒 | 第15-18页 |
| 1.2.2 整合载体 | 第18-19页 |
| 1.3 启动子 | 第19-26页 |
| 1.3.1 枯草杆菌的启动子概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 组成型启动子 | 第20-21页 |
| 1.3.3 诱导型启动子 | 第21-26页 |
| 1.3.4 现有启动子存在的问题和展望 | 第26页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌启动子探针系统概况 | 第26-28页 |
| 1.4.1 启动子探针系统的意义 | 第26-27页 |
| 1.4.2 探针载体的报告基因 | 第27-28页 |
| 1.5 枯草杆菌表达系统的现状及发展方向 | 第28-30页 |
| 1.5.1 现有的枯草芽孢杆菌表达系统 | 第28-29页 |
| 1.5.2 枯草芽孢杆菌表达系统的发展趋势和展望 | 第29-30页 |
| 1.6 本研究的目的 | 第30-31页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌表达系统的构建 | 第31-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.1.1 材料 | 第31-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.2.1 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体的构建 | 第36页 |
| 2.2.2 枯草芽孢杆菌表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 2.2.3 麦芽糖对表达系统的诱导表达检测 | 第39-40页 |
| 2.2.4 葡萄糖对 Pglv-inframe启动子的抑制 | 第40页 |
| 2.2.5 外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-42页 |
| 2.3.1 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体的构建 | 第41页 |
| 2.3.2 枯草芽孢杆菌表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.4 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌电转化方法的优化 | 第43-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 质粒与菌种 | 第43页 |
| 3.1.2 PCR 扩增引物 | 第43页 |
| 3.1.3 培养条件 | 第43页 |
| 3.1.4 大肠杆菌的感受态制备及电转化方法 | 第43-44页 |
| 3.1.5 枯草芽孢杆菌的感受态制备及电转化方法 | 第44-46页 |
| 3.1.6 整合载体的构建 | 第46页 |
| 3.1.7 电转化介导的枯草芽孢杆菌整合 | 第46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.2.1 电转化方法的比较 | 第46-47页 |
| 3.2.2 电转化介导的枯草芽孢杆菌整合 | 第47-50页 |
| 3.2.3 电转化介导的枯草芽孢杆菌 spo0A 基因的敲除 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌麦芽糖操纵元启动子表达系统的优化 | 第53-66页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-58页 |
| 4.1.1 菌株和质粒及其来源 | 第53页 |
| 4.1.2 生化试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 PCR 扩增引物 | 第53页 |
| 4.1.4 枯草芽孢杆菌的培养 | 第53-55页 |
| 4.1.5 Pglv启动子的定点突变 | 第55页 |
| 4.1.6 质粒载体的构建 | 第55页 |
| 4.1.7 枯草芽孢杆菌宿主的优化 | 第55-56页 |
| 4.1.8 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第56-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-64页 |
| 4.2.1 Pglv启动子的定点突变 | 第58-60页 |
| 4.2.2 葡萄糖对点突变启动子的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.3 枯草芽孢杆菌表达宿主的优化 | 第61-63页 |
| 4.2.4 EhemA 和 BhemA 基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第63-64页 |
| 4.3 讨论 | 第64-65页 |
| 4.4 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌强启动子的克隆 | 第66-83页 |
| 5.1 材料与方法 | 第66-71页 |
| 5.1.1 质粒和菌种 | 第66页 |
| 5.1.2 PCR 扩增引物 | 第66页 |
| 5.1.3 启动子克隆载体的构建 | 第66-69页 |
| 5.1.4 启动子的克隆 | 第69页 |
| 5.1.5 序列分析 | 第69页 |
| 5.1.6 启动子的亚克隆 | 第69-70页 |
| 5.1.7 启动子的重组 | 第70页 |
| 5.1.8 表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 5.1.9 半乳糖苷酶的测定 | 第71页 |
| 5.2 结果与分析 | 第71-79页 |
| 5.2.1 从地衣芽孢杆菌基因组 DNA 中筛选分离强启动子 | 第71-74页 |
| 5.2.2 启动子序列分析 | 第74-78页 |
| 5.2.3 启动子的优化 | 第78页 |
| 5.2.4 PLAPS启动子表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 5.3 讨论 | 第79-82页 |
| 5.4 小结 | 第82-83页 |
| 第六章 结论 | 第83-85页 |
| 6.1 研究结论 | 第83页 |
| 6.2 本研究创新点 | 第83-84页 |
| 6.3 下一步研究思路 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 附录 | 第95-99页 |
| 缩略语表 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简介 | 第101页 |
