| 摘要 | 第11-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 英文缩写 | 第21-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-46页 |
| 1 奶牛乳腺炎及相关候选基因的研究进展 | 第23-33页 |
| 1.1 奶牛繁殖性状及乳腺炎概况 | 第23-32页 |
| 1.1.1 奶牛繁殖性状概况 | 第23页 |
| 1.1.2 牛繁殖力的影响因素 | 第23-25页 |
| 1.1.3 奶牛乳腺炎的危害及特征 | 第25-26页 |
| 1.1.4 奶牛乳腺炎的感染途径和发病机理 | 第26-27页 |
| 1.1.5 奶牛隐性乳腺炎的检测方法 | 第27-29页 |
| 1.1.6 牛奶中高体细胞数的危害 | 第29-30页 |
| 1.1.7 奶牛乳腺炎的防治 | 第30-32页 |
| 1.1.7.1 对奶牛乳腺炎的预防 | 第30-31页 |
| 1.1.7.2 奶牛乳腺炎的常规治疗 | 第31-32页 |
| 1.2 分子育种与奶牛乳腺炎抗性关系 | 第32-33页 |
| 2 可变剪切概述 | 第33-37页 |
| 2.1 可变剪切的不同模式 | 第34-35页 |
| 2.2 可变剪切的调节机制 | 第35-37页 |
| 2.2.1 变剪切的顺式作用元件 | 第36页 |
| 2.2.2 可变剪切的剪切因子 | 第36-37页 |
| 3 补体系统 | 第37-45页 |
| 3.1 补体的激活途径 | 第38-41页 |
| 3.1.1 补体活化的经典途径 | 第38-39页 |
| 3.1.2 补体活化的替代途径 | 第39页 |
| 3.1.3 补体活化的凝集素(MBL)途径 | 第39-40页 |
| 3.1.4 补体活化的共同途径 | 第40-41页 |
| 3.2 补体系统的活化调节及生物学意义 | 第41-45页 |
| 3.2.1 牛补体C6-C9的结构与功能 | 第41-42页 |
| 3.2.1.1 牛补体C6与C7的结构和基因定位 | 第41-42页 |
| 3.2.1.2 牛补体C8与C9的结构和基因定位 | 第42页 |
| 3.2.2 C6-9的生理功能 | 第42-43页 |
| 3.2.3 C6-9补体的遗传多态性 | 第43-44页 |
| 3.2.4 C6-9基因可变剪切的研究进展 | 第44-45页 |
| 4 研究的目的意义 | 第45-46页 |
| 第二章 C6基因的多态性研究 | 第46-74页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 实验牛群的选择 | 第46页 |
| 1.2 DNA的提取 | 第46-47页 |
| 1.3 C6基因的处理 | 第47页 |
| 1.4 基因型分型 | 第47页 |
| 1.5 测序 | 第47页 |
| 1.6 统计分析 | 第47页 |
| 2 试验材料 | 第47-48页 |
| 3 主要仪器设备和药品试剂 | 第48-53页 |
| 3.1 主要仪器设备 | 第48-49页 |
| 3.2 试验主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.3 主要试剂的配制 | 第50-53页 |
| 3.3.1 提取牛血液基因组DNA所需试剂的配制 | 第51页 |
| 3.3.2 琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳所用相关试剂 | 第51-53页 |
| 4 实验方法 | 第53-59页 |
| 4.1 奶牛DNA的提取 | 第53页 |
| 4.2 DNA溶液吸光度的测定 | 第53-54页 |
| 4.3 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第54页 |
| 4.4 牛奶体细胞测定 | 第54页 |
| 4.5 引物溶液的配制 | 第54页 |
| 4.6 PCR反应最佳条件的设立 | 第54-55页 |
| 4.7 PCR扩增产物的检测 | 第55-56页 |
| 4.8 DNA的测序和基因分型 | 第56-58页 |
| 4.9 C6基因外显子上各SNP位点多态性分析 | 第58-59页 |
| 5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第59-61页 |
| 6 数据统计分析方法 | 第61-64页 |
| 6.1 数据收集和处理 | 第61页 |
| 6.2 基因频率和基因型频率的计算 | 第61-62页 |
| 6.3 Hardy-Weinberg平衡检验 | 第62页 |
| 6.4 遗传多态性分析 | 第62-63页 |
| 6.5 不同基因型与生产性状的相关分析 | 第63-64页 |
| 6.6 C6基因单倍型分析 | 第64页 |
| 7 结果与分析 | 第64-72页 |
| 7.1 DNA的提取结果 | 第64页 |
| 7.2 牛C6基因的PCR结果 | 第64-65页 |
| 7.3 牛C6基因的基因测序结果 | 第65-66页 |
| 7.4 牛C6基因的基因酶切分型结果 | 第66-67页 |
| 7.5 牛C6基因的基因型频率、基因频率分析 | 第67-68页 |
| 7.6 C6基因在群体中的Hardy-Weinberg平衡检验结果、多态信息含量、杂合度、有效等位基因数分析 | 第68-69页 |
| 7.7 C6基因各基因型与乳腺炎关联性分析 | 第69-71页 |
| 7.8 C6基因各单倍型及单倍型组合与乳腺炎关联性分析 | 第71-72页 |
| 8 讨论 | 第72-74页 |
| 第三章 补体C6,C7,C9可变剪切体的鉴定与表达 | 第74-91页 |
| 1 材料与方法 | 第75-80页 |
| 1.1 试验材料 | 第75页 |
| 1.2 试验方法 | 第75-80页 |
| 1.2.1 组织样RNA的提取 | 第75-76页 |
| 1.2.2 RT-PCR扩增 | 第76-77页 |
| 1.2.3 PCR目的片段胶回收 | 第77-78页 |
| 1.2.4 连接转化 | 第78-79页 |
| 1.2.5 荧光定量PCR | 第79-80页 |
| 1.2.6 数据处理 | 第80页 |
| 2 试验结果 | 第80-89页 |
| 2.1 RNA样品检测 | 第80-81页 |
| 2.2 牛C6、C7、C9基因的mRNA在不同组织中表达 | 第81-82页 |
| 2.3 牛C6-C9基因可变剪切体的鉴定 | 第82-85页 |
| 2.4 牛C6、C7、C9基因的不同剪切异构体蛋白和功能性结构域的预测 | 第85-87页 |
| 2.5 可变剪切的定量分析 | 第87-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 第四章 C9基因启动子的克隆及活性分析 | 第91-104页 |
| 1 材料与方法 | 第92-99页 |
| 1.1 试验细胞 | 第92页 |
| 1.2 试验方法 | 第92-96页 |
| 1.2.1 牛C6-9基因5’侧调控区序列的生物信息学分析 | 第92页 |
| 1.2.2 牛C6-9基因5’侧翼区序列扩增及克隆 | 第92-96页 |
| 1.2.2.1 设计引物 | 第92-93页 |
| 1.2.2.2 PCR扩增 | 第93页 |
| 1.2.2.4 载体构建 | 第93-94页 |
| 1.2.2.5 RT-PCR扩增 | 第94页 |
| 1.2.2.6 目的片段的回收 | 第94-95页 |
| 1.2.2.7 目的片段的酶切 | 第95页 |
| 1.2.2.8 连接转化 | 第95页 |
| 1.2.2.9 质粒小提 | 第95页 |
| 1.2.3.10 细胞培养 | 第95-96页 |
| 1.3 C9 5’侧翼区序列pGL-3真核表达载体构建 | 第96-98页 |
| 1.3.1 设计引物 | 第96-97页 |
| 1.3.2 PCR扩增 | 第97页 |
| 1.3.3 连接转化及质粒提取 | 第97页 |
| 1.3.4 瞬时转染 | 第97-98页 |
| 1.3.5 荧光活性分析 | 第98页 |
| 1.4 牛C9基因5’调控区SNPs的筛选及分析 | 第98-99页 |
| 1.4.1 SNPs的筛选 | 第98-99页 |
| 1.4.2 C9浓度的测定 | 第99页 |
| 1.4.3 数据分析 | 第99页 |
| 2 试验结果 | 第99-102页 |
| 2.1 牛C6-C9基因启动子生物信息学分析 | 第99-100页 |
| 2.2 重组质粒的鉴定结果 | 第100页 |
| 2.3 细胞转染与荧光检测的结果 | 第100-101页 |
| 2.4 牛C9基因5’调控区启动子活性的分析 | 第101页 |
| 2.5 SNPs与C9的相关性分析 | 第101-102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
