| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 哺乳动物MELK基因的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 AMPK基因家族研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 AMPK基因家族的结构及成员 | 第12页 |
| 1.1.2 AMPK基因家族的功能 | 第12-13页 |
| 1.2 AMPK家族蛋白MELK的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 MELK的发现 | 第13-14页 |
| 1.2.2 MELK的磷酸化作用与蛋白互作研究 | 第14-15页 |
| 1.2.3 MELK在细胞分裂中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 MELK在视网膜发育中的功能 | 第16页 |
| 1.2.5 MELK参与早期胚胎的造血作用 | 第16-17页 |
| 1.2.6 MELK抑制BCL-G介导的细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 1.2.7 MELK与乳腺癌的关系 | 第18页 |
| 1.2.8 MELK参与神经祖细胞增殖并与多种脑瘤密切相关 | 第18-19页 |
| 1.2.9 MELK促进结直肠癌对放化疗的抵抗 | 第19页 |
| 1.3 展望 | 第19-21页 |
| 实验研究 | 第21-45页 |
| 第二章 猪MELK基因的克隆和序列分析 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 工程菌种和质粒来源 | 第22页 |
| 2.1.5 分子生物学分析软件和网站 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 电子克隆猪MELK | 第23页 |
| 2.2.2 分子克隆猪MELK | 第23-25页 |
| 2.2.3 阳性重组质粒菌液PCR鉴定和测序 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.3.1 电子克隆猪MELK结果 | 第26页 |
| 2.3.2 PCR产物MELK电泳结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组质粒菌液PCR电泳结果 | 第27-28页 |
| 2.3.4 pEASY-MELK测序结果与序列分析 | 第28-29页 |
| 2.3.5 猪源MELK外显子软件预测结果 | 第29页 |
| 2.3.6 MELK进化分析 | 第29-30页 |
| 2.3.7 猪MELK蛋白与其它物种蛋白的同源性分析结果 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 猪MELK基因在SUVEC中的表达 | 第32-39页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 载体、细胞和菌种 | 第32页 |
| 3.1.2 酶和试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 构建pEGFP-C1-MELK重组真核表达载体 | 第33-34页 |
| 3.2.2 细胞培养和质粒转染 | 第34-35页 |
| 3.2.3 Western blotting检测过表达的MELK蛋白 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-37页 |
| 3.3.1 重组质粒pEGFP-C1-MELK双酶切鉴定和测序结果 | 第36页 |
| 3.3.2 重组质粒浓度检测结果 | 第36-37页 |
| 3.3.3 重组质粒转染SUVEC后荧光显微镜下观察 | 第37页 |
| 3.3.4 Western blotting检测结果 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.4.1 真核表达载体的选择 | 第37-38页 |
| 3.4.2 猪可替代小鼠做为研究人源MELK的模式生物 | 第38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 Real time PCR检测MELK在猪各个组织中的表达分布 | 第39-45页 |
| 4.1 材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 组织来源 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂和工具酶 | 第39页 |
| 4.1.3 主要设备 | 第39-40页 |
| 4.2 方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 RNA提取 | 第40页 |
| 4.2.2 反转录 | 第40页 |
| 4.2.3 PCR扩增 | 第40页 |
| 4.2.4 进行Real-time PCR反应 | 第40-41页 |
| 4.3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 4.3.1 猪各组织提取RNA的检测 | 第41-42页 |
| 4.3.2 各组织MELK及其内参基因p-actin的扩增 | 第42页 |
| 4.3.3 各组织MELK基因mRNA表达丰度的差异性检验 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 4.4.1 实时荧光定量PCR的优点 | 第43页 |
| 4.4.2 猪源MELK的组织分布 | 第43-44页 |
| 4.5 小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 附录1 | 第52-53页 |
| 附录2 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 个人简介 | 第57页 |
