| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 鹿茸的发生与再生 | 第15-17页 |
| 1.1.1 鹿茸的发生 | 第15-16页 |
| 1.1.2 鹿茸的再生 | 第16-17页 |
| 1.2 鹿茸干细胞 | 第17页 |
| 1.3 鹿茸作为软骨发生研究模型的优势 | 第17-19页 |
| 1.4 与鹿茸软骨组织发生相关的调控因子 | 第19-20页 |
| 1.4.1 Sox家族 | 第19页 |
| 1.4.2 Runx2转录因子 | 第19页 |
| 1.4.3 胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ） | 第19-20页 |
| 1.4.4 胶原蛋白Ⅰ、ⅡA、ⅡB和X | 第20页 |
| 1.5 研究内容、目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 梅花鹿CGI99基因重组慢病毒载体的构建及鉴定 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 梅花鹿CGI99基因RNAi高分靶位点序列的筛选 | 第21-23页 |
| 2.1.4 梅花鹿CGI99基因shRNA单核苷酸链的构建及合成 | 第23页 |
| 2.1.5 shRNA单核苷酸链的退火 | 第23-24页 |
| 2.1.6 载体质粒pLVTHM的转化 | 第24页 |
| 2.1.7 载体质粒pLVTHM的小量提取 | 第24-25页 |
| 2.1.8 载体质粒pLVTHM的酶切 | 第25页 |
| 2.1.9 酶切质粒DNA片段的胶回收 | 第25-26页 |
| 2.1.10 重组载体的构建 | 第26页 |
| 2.1.11 重组载体pLVTHM的鉴定 | 第26页 |
| 2.2 实验结果 | 第26-28页 |
| 2.2.1 shRNA退火结果 | 第26-27页 |
| 2.2.2 pLVTHM质粒双酶切结果 | 第27-28页 |
| 2.2.3 阳性重组质粒pLVTHM的PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 低表达CGI99基因AP细胞系的建立及相关生物学鉴定 | 第30-46页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第30-38页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第30页 |
| 3.1.3 慢病毒系统所需的三种质粒的大量提取 | 第30-31页 |
| 3.1.4 包装重组慢病毒 | 第31-32页 |
| 3.1.5 重组慢病毒的收集与浓缩 | 第32页 |
| 3.1.6 重组慢病毒感染AP细胞 | 第32页 |
| 3.1.7 RT-PCR检测AP细胞中CGI99基因mRNA的RNAi效率 | 第32-34页 |
| 3.1.8 MTT实验检测细胞增殖能力 | 第34-35页 |
| 3.1.9 Western-Blot检测CGI99蛋白的变化 | 第35-36页 |
| 3.1.10 AP、AP-S1及AP-NC细胞的微粒体培养 | 第36-37页 |
| 3.1.11 微粒体的固定、包埋、切片及染色 | 第37页 |
| 3.1.12 RT-PCR检测软骨分化趋势 | 第37-38页 |
| 3.2 结果 | 第38-43页 |
| 3.2.1 三质粒共转染 293t细胞效果检测 | 第38页 |
| 3.2.2 重组慢病毒对梅花鹿AP细胞的感染 | 第38-39页 |
| 3.2.3 慢病毒感染效率的检测 | 第39-40页 |
| 3.2.4 CGI99下调对AP细胞分裂繁殖的影响 | 第40页 |
| 3.2.5 Western-Blot结果 | 第40-41页 |
| 3.2.6 微粒体活性鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.2.7 染色鉴定结果 | 第42页 |
| 3.2.8 微粒体中Collagen Ⅱ基因mRNA的RT-PCR检测结果 | 第42-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
