| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1 柑橘衰退病研究进展 | 第14-20页 |
| 1.1 寄主范围、症状、株系分化、传播途径 | 第14-16页 |
| 1.2 分子生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.3 CTV的检测与鉴定 | 第17-19页 |
| 1.3.1 指示植物鉴定 | 第17页 |
| 1.3.2 电镜检测 | 第17页 |
| 1.3.3 血清学检测 | 第17-18页 |
| 1.3.4 分子生物学检测 | 第18-19页 |
| 1.4 柑橘衰退病的防控 | 第19-20页 |
| 2 柑橘黄化脉明病毒研究进展 | 第20-23页 |
| 2.1 症状、分布、寄主范围及传播途径 | 第20-21页 |
| 2.2 分子生物学特性 | 第21-22页 |
| 2.3 CYVCV的检测方法 | 第22-23页 |
| 2.3.1 症状观察和电镜观察 | 第22页 |
| 2.3.2 分子生物学检测方法 | 第22页 |
| 2.3.3 血清学检测方法 | 第22-23页 |
| 3 单克隆抗体技术 | 第23-31页 |
| 3.1 抗体的基本结构及特性 | 第23-24页 |
| 3.2 单克隆抗体技术 | 第24-27页 |
| 3.2.1 杂交瘤细胞制备的原理 | 第24-26页 |
| 3.2.2 杂交瘤技术基本流程 | 第26-27页 |
| 3.3 单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第27-31页 |
| 3.3.1 病毒病的检测与诊断 | 第28页 |
| 3.3.2 病毒株系和分离物分型鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3.3 作为探针分析病毒基因组功能 | 第29页 |
| 3.3.4 其他方面应用 | 第29-31页 |
| 第二章 柑橘衰退病毒外壳蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备和应用 | 第31-60页 |
| 1 材料与方法 | 第31-47页 |
| 1.1 病毒样品 | 第31页 |
| 1.2 菌株、抗体、酶、试剂 | 第31-32页 |
| 1.3 CTV CP原核表达 | 第32-36页 |
| 1.3.1 设计引物 | 第32页 |
| 1.3.2 TRIzol法提取总RNA、RT-PCR | 第32-33页 |
| 1.3.3 PCR产物纯化 | 第33-34页 |
| 1.3.4 pET-28a质粒的扩增和提取 | 第34-35页 |
| 1.3.5 CTV CP和pET-28a双酶切 | 第35页 |
| 1.3.6 酶切后产物清洁 | 第35页 |
| 1.3.7 目的片段(CTV CP)与酶切pET-28a连接 | 第35页 |
| 1.3.8 连接产物转化DH5α | 第35-36页 |
| 1.3.9 菌落PCR | 第36页 |
| 1.3.10 测序结果比对、转化表达菌 | 第36页 |
| 1.4 CTV CP蛋白的原核表达及纯化 | 第36-40页 |
| 1.4.1 诱导表达CTV CP | 第36-37页 |
| 1.4.2 重组CTV CP蛋白的纯化 | 第37页 |
| 1.4.3 SDS-PAGE及Western blot分析 | 第37-40页 |
| 1.5 CTV多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 1.6 单克隆抗体的制备 | 第40-42页 |
| 1.6.1 细胞融合与培养 | 第40-41页 |
| 1.6.2 杂交瘤细胞克隆及扩增 | 第41页 |
| 1.6.3 杂交瘤细胞冻存与复苏 | 第41页 |
| 1.6.4 腹水制备及纯化 | 第41-42页 |
| 1.7 血清学方法的建立及其应用 | 第42-45页 |
| 1.7.2 检测CTV的dot-ELISA方法的建立 | 第43页 |
| 1.7.3 检测CTV的Tissue blot-ELISA方法的建立 | 第43-44页 |
| 1.7.4 检测CTV的TAS-ELISA方法的建立 | 第44-45页 |
| 1.8 检测CTV免疫胶体金试纸条的研制 | 第45-47页 |
| 1.8.1 胶体金溶液的制备 | 第45页 |
| 1.8.2 胶体金标记最适pH的确定 | 第45页 |
| 1.8.3 胶体金标记抗体的制备和纯化 | 第45-46页 |
| 1.8.4 检测试纸条的条件优化 | 第46页 |
| 1.8.5 试纸条的装配 | 第46页 |
| 1.8.6 试纸条检测结果判定 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-58页 |
| 2.1 CTV CP蛋白的原核表达与纯化 | 第47-48页 |
| 2.2 CTV单克隆抗体的制备和亚类鉴定 | 第48-49页 |
| 2.3 Western blot和TAS-ELISA分析单抗的特异性 | 第49-51页 |
| 2.4 TAS-ELISA分析单抗的灵敏度 | 第51页 |
| 2.5 检测CTV的TAS-ELISA方法的建立及其灵敏度分析 | 第51-52页 |
| 2.6 dot-ELISA检测方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第52-53页 |
| 2.7 Tissue blot-ELISA检测方法的建立 | 第53-54页 |
| 2.8 胶体金免疫试纸条的研制 | 第54-56页 |
| 2.9 柑橘CTV病害调查 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 柑橘黄化脉明病毒单克隆抗体的制备及其检测应用 | 第60-75页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 1.1 病毒、细菌、质粒、酶、培养基、试剂盒和生化试剂 | 第60-61页 |
| 1.2 CYVCV CP原核表达和纯化 | 第61页 |
| 1.3 单克隆抗体和多抗血清的制备 | 第61页 |
| 1.4 CYVCV血清学检测方法的建立 | 第61-62页 |
| 1.4.1 dot-ELISA、Tissue blot-ELISA、TAS-ELISA方法的建立 | 第61页 |
| 1.4.2 DAS-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第61-62页 |
| 1.5 RT-PCR检测方法 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-73页 |
| 2.1 CYVCV CP的原核表达和蛋白纯化 | 第62-64页 |
| 2.2 CYVCV单抗和多抗的制备及其特性分析 | 第64-65页 |
| 2.3 Western blot和TAS-ELISA分析单抗的特异性 | 第65-66页 |
| 2.4 检测CYVCV的TAS-ELISA的建立及抗体的灵敏度分析 | 第66-68页 |
| 2.5 检测CYVCV的dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的建立 | 第68-69页 |
| 2.6 DAS-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第69-71页 |
| 2.7 血清学方法检测果园柑橘样品 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第85-86页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第86-90页 |
| 在校期间所取得的科研成果 | 第90页 |
