| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1 卵子的发生过程 | 第16页 |
| 1.2 卵母细胞成熟的调控 | 第16-18页 |
| 1.3 卵母细胞的体外成熟及其影响因素 | 第18-21页 |
| 1.3.1 卵母细胞的体外成熟 | 第18-19页 |
| 1.3.2 影响卵母细胞体外成熟的因素 | 第19-21页 |
| 1.4 卵丘细胞在卵母细胞成熟发育中的作用 | 第21-22页 |
| 2 脑源性神经营养因子(BDNF)的研究进展 | 第22-28页 |
| 2.1 BDNF的生物学特征 | 第22-23页 |
| 2.2 BDNF的受体及其信号通路 | 第23-26页 |
| 2.2.1 BDNF的受体 | 第23-24页 |
| 2.2.2 BDNF受体介导的信号通路 | 第24-26页 |
| 2.3 BDNF在哺乳动物卵巢中的表达及功能 | 第26-28页 |
| 2.3.1 BDNF在卵巢中的表达 | 第26-27页 |
| 2.3.2 BDNF对卵母细胞成熟的作用 | 第27-28页 |
| 3 研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二部分 试验研究 | 第29-79页 |
| 第一章 水牛BDNF基因克隆、序列分析及其在不同组织中的表达模式 | 第30-50页 |
| 1 材料与方法 | 第30-36页 |
| 1.1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1.1 组织材料 | 第30-31页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 1.1.5 生物信息分析软件 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-36页 |
| 1.2.1 各组织总RNA提取 | 第32页 |
| 1.2.2 各组织cDNA第一链合成 | 第32-33页 |
| 1.2.3 引物设计与合成 | 第33页 |
| 1.2.4 BDNF基因编码区PCR扩增 | 第33-34页 |
| 1.2.5 PCR产物胶回收、克隆及鉴定 | 第34-35页 |
| 1.2.6 荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 1.3 数据处理分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-47页 |
| 2.1 水牛BDNF基因编码区的克隆与生物信息学分析 | 第36-44页 |
| 2.1.1 水牛BDNF基因的克隆与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.1.2 水牛BDNF基因序列分析 | 第37-41页 |
| 2.1.3 水牛BDNF基因生物信息学分析预测 | 第41-44页 |
| 2.2 BDNF及其受体在胎儿及成年水牛组织中的表达模式 | 第44-47页 |
| 2.2.1 BDNF mRNA在水牛组织中的表达 | 第44-45页 |
| 2.2.2 TrkB mRNA在水牛组织中的表达 | 第45页 |
| 2.2.3 p75 mRNA在水牛组织中的表达 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 3.1 水牛BDNF基因的克隆及生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 3.2 BDNF及其受体在胎儿及成年水牛组织中的表达模式 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 第二章 BDNF及其受体在水牛卵泡、卵母细胞及早期胚胎中的表达模式 | 第50-68页 |
| 1 材料与方法 | 第50-57页 |
| 1.1 材料 | 第50-52页 |
| 1.1.1 组织材料 | 第51页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第51页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第51-52页 |
| 1.2 方法 | 第52-57页 |
| 1.2.1 免疫组化 | 第52-54页 |
| 1.2.2 卵泡液收集及ELISA浓度测定 | 第54页 |
| 1.2.3 卵泡颗粒细胞收集、RNA提取及反转录 | 第54页 |
| 1.2.4 卵母细胞体外成熟及体外受精 | 第54-55页 |
| 1.2.5 早期胚胎体外培养(IVC) | 第55页 |
| 1.2.6 卵母细胞、卵丘细胞及早期胚胎的收集 | 第55页 |
| 1.2.7 微量反转 | 第55-56页 |
| 1.2.8 引物设计合成及qRT-PCR | 第56页 |
| 1.2.9 免疫荧光染色 | 第56-57页 |
| 1.3 数据处理分析 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-64页 |
| 2.1 BDNF在水牛卵巢中的表达定位 | 第57-58页 |
| 2.2 BDNF及其受体在水牛不同直径卵泡中的表达 | 第58-59页 |
| 2.2.1 ELISA测定不同直径卵泡的卵泡液中BDNF浓度 | 第58-59页 |
| 2.3 BDNF及其受体在水牛COCs中的表达 | 第59-62页 |
| 2.3.1 免疫荧光染色检测BDNF及其受体在COCs中的表达 | 第60-61页 |
| 2.3.2 qRT-PCR检测BDNF及其受体在体外成熟过程中卵母细胞及卵丘细胞中的表达 | 第61-62页 |
| 2.4 BDNF及其受体在水牛IVF早期胚胎中的表达 | 第62-64页 |
| 2.4.1 免疫荧光染色检测BDNF及其受体在早期胚胎中的表达 | 第62-63页 |
| 2.4.2 qRT-PCR检测BDNF及其受体在早期胚胎中的表达 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 3.1 BDNF在水牛卵泡中的定位和表达 | 第64-65页 |
| 3.2 BDNF及其受体在水牛COCs中的表达 | 第65-66页 |
| 3.3 BDNF及其受体在水牛早期胚胎中的表达 | 第66-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 第三章 BDNF对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其作用机制 | 第68-79页 |
| 1 材料与方法 | 第68-70页 |
| 1.1 材料 | 第69页 |
| 1.1.1 组织材料 | 第69页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第69页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第69页 |
| 1.2 方法 | 第69-70页 |
| 1.2.1 卵母细胞体外成熟及体外受精 | 第69页 |
| 1.2.2 早期胚胎体外培养 | 第69-70页 |
| 1.2.3 COCs体外成熟培养后卵丘细胞的收集和反转录 | 第70页 |
| 1.2.4 引物设计合成及qRT-PCR | 第70页 |
| 1.3 数据处理分析 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-74页 |
| 2.1 BDNF对水牛卵母细胞体外成熟培养效果的影响 | 第70-71页 |
| 2.2 成熟液中添加BDNF对水牛早期胚胎发育的影响 | 第71页 |
| 2.3 BDNF对水牛裸卵体外成熟培养效果的影响 | 第71-72页 |
| 2.4 成熟液中添加受体TrkB及p75抑制剂对卵母细胞成熟效果的影响 | 第72-73页 |
| 2.5 BDNF对卵丘细胞相关基因表达的影响 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-78页 |
| 3.1 BDNF对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的促进作用 | 第74-75页 |
| 3.2 BDNF促进水牛卵母细胞体外成熟的作用机制 | 第75-78页 |
| 4 结论 | 第78-79页 |
| 全文结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录一 | 第86-88页 |
| 附录二 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第90页 |
