| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| 1.1 柑橘主要采后真菌病害 | 第9-10页 |
| 1.2 农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 农杆菌介导丝状真菌转化的基本原理 | 第10-11页 |
| 1.2.2 农杆菌介导转化法在丝状真菌研究中已有的进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 农杆菌介导转化的特点 | 第12页 |
| 1.2.4 影响农杆菌介导丝状真菌转化效率的因素 | 第12-13页 |
| 1.2.5 农杆菌介导转化在丝状真菌研究中的应用前景 | 第13页 |
| 1.3 RNAi技术在基因功能研究上的进展 | 第13-16页 |
| 1.3.1 RNAi技术的发现 | 第13-14页 |
| 1.3.2 RNAi技术在真菌基因功能上的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 RNAi技术的特点 | 第15页 |
| 1.3.4 RNAi技术在真菌中的应用前景 | 第15-16页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 实验材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 实验菌种，质粒及其来源 | 第17页 |
| 2.1.2 主要培养基和抗生素 | 第17-18页 |
| 2.1.3 其他试剂及材料 | 第18-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-33页 |
| 2.2.1 指状青霉对抗生素的敏感性检测 | 第20页 |
| 2.2.2 农杆菌介导指状青霉转化 | 第20-21页 |
| 2.2.3 转化子的稳定性及分子检测 | 第21-22页 |
| 2.2.4 转化子的致病力检测 | 第22页 |
| 2.2.5 Southern blot确定转化子T-DNA插入拷贝数 | 第22-23页 |
| 2.2.6 Tail-PCR、hi Tail-PCR扩增T-DNA插入位点侧翼序列 | 第23-27页 |
| 2.2.7 RNAi干涉载体构建 | 第27-30页 |
| 2.2.8 干涉转化子干涉后目的基因表达程度检测 | 第30-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-45页 |
| 3.1 指状青霉对抗生素的敏感性 | 第33-34页 |
| 3.1.1 指状青霉对潮霉素B抗性检测 | 第33-34页 |
| 3.1.2 指状青霉对卡那霉素、G418抗性检测 | 第34页 |
| 3.2 根瘤农杆菌介导指状青霉转化体系的优化 | 第34-38页 |
| 3.2.1 预培养中AS对转化效率的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.2 指状青霉孢子浓度对转化效率的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.3 共培养时间对转化效率的影响 | 第36页 |
| 3.2.4 共培养温度对转化效率的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.5 不同承载膜对转化效率的影响 | 第37-38页 |
| 3.3 待定转化子PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.4 转化子的遗传稳定性检测 | 第39-40页 |
| 3.5 转化子的致病力检测 | 第40-41页 |
| 3.6 Southern blot分析 | 第41-42页 |
| 3.7 Tail-PCR分析 | 第42-43页 |
| 3.8 干涉载体构建 | 第43-44页 |
| 3.9 干涉程度检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 根瘤农杆菌介导柑橘指状青霉转化体系的优化 | 第45-47页 |
| 4.1.1 预培养中AS对转化效率的影响 | 第45页 |
| 4.1.2 指状青霉孢子浓度对转化效率的影响 | 第45-46页 |
| 4.1.3 共培养温度和时间对转化效率的影响 | 第46页 |
| 4.1.4 不同承载膜对转化效率的影响 | 第46-47页 |
| 4.2 转化子的遗传稳定性及分子分析 | 第47-48页 |
| 4.2.1 转化子的遗传稳定性分析 | 第47页 |
| 4.2.2 转化子的阳性分析 | 第47页 |
| 4.2.3 转化子拷贝数分析 | 第47-48页 |
| 4.3 Tail-PCR扩增侧翼序列 | 第48页 |
| 4.4 RNAi验证基因功能 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
