| 致谢 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-18页 |
| 1 绪论 | 第18-27页 |
| 1.1 智力障碍及其病因 | 第18-20页 |
| 1.2 智力障碍与泛素化调控 | 第20-22页 |
| 1.3 智力障碍与DCAF蛋白CRBN | 第22-24页 |
| 1.4 智力障碍与BK离子通道 | 第24-26页 |
| 1.5 本课题拟解决的科学问题 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-37页 |
| 2.1.1 重要化合物 | 第27页 |
| 2.1.2 其他实验试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.3 抗体 | 第29-30页 |
| 2.1.4 常用缓冲液 | 第30-34页 |
| 2.1.5 动物 | 第34-35页 |
| 2.1.6 细胞系 | 第35页 |
| 2.1.7 质粒和细菌 | 第35-36页 |
| 2.1.8 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-62页 |
| 2.2.1 运动活性测试(Locomotor activity test) | 第37-38页 |
| 2.2.2 光暗转换测试(Light/dark transfer test) | 第38页 |
| 2.2.3 视力测试(Vision testing) | 第38-39页 |
| 2.2.4 新物体识别测试(Novel object recognition test) | 第39页 |
| 2.2.5 暗示和环境关联的条件性恐惧测试(Cued and contextual fearconditioning) | 第39-40页 |
| 2.2.6 Barnes迷宫测试(Barnes maze) | 第40-42页 |
| 2.2.7 Morris水迷宫测试(Morris water maze) | 第42-43页 |
| 2.2.8 构建基因表达质粒 | 第43-44页 |
| 2.2.9 点突变 | 第44-45页 |
| 2.2.10 常用细胞培养技术 | 第45-46页 |
| 2.2.11 RNAi技术和细胞转染 | 第46-47页 |
| 2.2.12 细胞总蛋白的提取和蛋白浓度测定 | 第47-48页 |
| 2.2.13 细胞膜蛋白的提取 | 第48页 |
| 2.2.14 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第48-50页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀(Co-IP) | 第50-51页 |
| 2.2.16 泛素化鉴定 | 第51页 |
| 2.2.17 蛋白稳定性实验(CHX chasing assay) | 第51-52页 |
| 2.2.18 CRISPR基因编辑 | 第52-53页 |
| 2.2.19 慢病毒 | 第53-54页 |
| 2.2.20 RNA提取和Q-PCR | 第54-56页 |
| 2.2.21 琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第56-57页 |
| 2.2.22 质粒大量抽提 | 第57-59页 |
| 2.2.23 PCR产物直接回收(Axygen PCR Cleanup kit) | 第59-60页 |
| 2.2.24 膜片钳技术 | 第60-61页 |
| 2.2.25 统计学分析 | 第61-62页 |
| 3 实验结果 | 第62-88页 |
| 3.1 在小鼠大脑中敲除DDB1会导致认知障碍 | 第62-67页 |
| 3.2 CRBN敲除导致与DDB1敲除类似的认知障碍 | 第67-68页 |
| 3.3 DDB1敲除导致CRBN蛋白水平降低 | 第68-69页 |
| 3.4 智力障碍相关CRBN突变体们不能正常结合DDB1 | 第69-70页 |
| 3.5 不能正常结合DDB1的CRBN突变被SCF~(Fbxo7)靶向降解 | 第70-74页 |
| 3.6 失活的CRL4~(CRBN)使BK离子通道变得不稳定 | 第74-78页 |
| 3.7 CRBN突变使BK离子通道重新定向到SCF~(Fbxo7)上降解 | 第78-82页 |
| 3.8 CRBN突变导致通道浓度依赖性的BK通道电流降低 | 第82-86页 |
| 3.9 CRBN突变导致的学习和记忆障碍能够通过激活BK通道恢复 | 第86-88页 |
| 4 结论及意义 | 第88-90页 |
| 5 讨论 | 第90-92页 |
| 5.1 生理和病理条件下BK离子通道的两种泛素化修饰 | 第90页 |
| 5.2 SCF~(Fbxo7)降解BK离子通道的核心亚基 | 第90-91页 |
| 5.3 CRL4~(CRBN)突变通过改变BK离子通道活性引发智力障碍 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
