| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词索引表 | 第9-13页 |
| 1 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 口蹄疫研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 FMDV 流行病学 | 第13页 |
| 1.1.2 FMDV 病原学 | 第13-17页 |
| 1.1.3 FMDV 受体结合位点 | 第17页 |
| 1.1.4 FMDV 引起的亚临床感染和持续性感染 | 第17-18页 |
| 1.1.5 FMDV 疫苗研究进展 | 第18页 |
| 1.2 树突状细胞研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 DCs 的来源 | 第19页 |
| 1.2.2 DCs 的分化和成熟 | 第19页 |
| 1.2.3 DCs 的抗原捕获功能 | 第19-20页 |
| 1.2.4 DC 的抗原提呈途径 | 第20-21页 |
| 1.2.5 DC与FMDV的关系 | 第21-22页 |
| 1.3 DCs 激活特异性 T 淋巴细胞应答 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 试验材料及仪器 | 第24-29页 |
| 2.1 主要试验材料 | 第24-25页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 试验相关试剂配制 | 第25-29页 |
| 2.3.1 重组菌的培养和诱导表达用液 | 第25-26页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE 相关溶液 | 第26页 |
| 2.3.3 电洗脱用液 | 第26-27页 |
| 2.3.4 细胞培养用液 | 第27-28页 |
| 2.3.5 用于细胞爬片荧光标记前预处理的溶液 | 第28-29页 |
| 3 试验方法 | 第29-38页 |
| 3.1 重组 VP1-VP4 蛋白的纯化 | 第29-31页 |
| 3.1.1 菌株选择 | 第29页 |
| 3.1.2 重组菌的诱导表达 | 第29页 |
| 3.1.3 SDS-PAGE 凝胶的制备 | 第29-30页 |
| 3.1.4 表达产物 VP1-VP4 蛋白的 SDS- PAGE 电泳 | 第30页 |
| 3.1.5 目的蛋白的回收纯化及电洗脱 | 第30-31页 |
| 3.2 淋巴结 T 细胞和骨髓源树突状细胞的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.1 试验动物 | 第31页 |
| 3.2.2 小鼠颈浅淋巴结内 T 细胞的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.3 骨髓源树突细胞的制备 | 第32页 |
| 3.3 激光共聚焦荧光显微镜观察细胞摄取 VP1-VP4 抗原的动力学过程 | 第32-35页 |
| 3.3.1 FITC 标记 FMDV VP1-VP4 重组蛋白 | 第32-33页 |
| 3.3.2 玻片预处理 | 第33页 |
| 3.3.3 制备细胞爬片 | 第33页 |
| 3.3.4 试验组处理 | 第33-34页 |
| 3.3.5 经抑制剂处理的 BMDCs 负载 FMDV VP1-VP4-FITC 重组蛋白 | 第34页 |
| 3.3.6 荧光标记步骤 | 第34-35页 |
| 3.4 流式细胞术分析负载 VP1-VP4 融合蛋白的 BMDCs 与 T 细胞作用之后细胞表面分子的表达水平 | 第35-36页 |
| 3.5 ELISA 检测负载 VP1-VP4 蛋白的 BMDCs 激活 T 细胞释放细胞因子的水平 | 第36-38页 |
| 3.5.1 抑制抗原提呈的 MHC I 分子途径 | 第36页 |
| 3.5.2 抑制抗原提呈的 MHC II 分子途径 | 第36页 |
| 3.5.3 抑制循环内体向细胞膜的转运 | 第36-37页 |
| 3.5.4 应用 ELISA 试剂盒测定共培养物中 IFN-γ的含量 | 第37页 |
| 3.5.5 应用 ELISA 试剂盒测定共培养物中 IL-4、TGF-β、IL-17 的含量 | 第37-38页 |
| 4 试验结果 | 第38-68页 |
| 4.1 重组蛋白的诱导表达与纯化鉴定 | 第38-39页 |
| 4.1.1 重组菌的诱导表达和 SDS-PAGE 分析 | 第38页 |
| 4.1.2 重组 VP1-VP4 蛋白的纯化与浓度测定 | 第38-39页 |
| 4.2 BMDCs 的制备与表型鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白之后细胞内动力学变化 | 第40-55页 |
| 4.3.1 BMDCs 摄取和加工 VP1-VP4-FITC 动力学观察 | 第40-42页 |
| 4.3.2 抑制 BMDCs 表面受体对摄取 VP1-VP4 抗原的影响 | 第42-46页 |
| 4.3.3 抑制溶酶体的作用对 BMDCs 加工 VP1-VP4 抗原的影响 | 第46-49页 |
| 4.3.4 抑制 Hsp90 和蛋白酶体对 BMDCs 摄取和加工 VP1-VP4 抗原的影响 | 第49-53页 |
| 4.3.5 蛋白酶体和溶酶体双抑制对 BMDCs 摄取和加工 VP1-VP4 抗原的影响 | 第53-55页 |
| 4.4 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白并与 T 细胞共培养之后的表型变化 | 第55-58页 |
| 4.5 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白之后对 T 细胞的活化 | 第58-68页 |
| 4.5.1 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白之后激活 T 细胞产生 IFN-γ的水平 | 第58-61页 |
| 4.5.2 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白之后激活 T 细胞产生 IL-4 的水平 | 第61-63页 |
| 4.5.3 BMDCs 负载 VP1-VP4 蛋白之后激活 T 细胞产生 TGF-β1 的水平 | 第63-66页 |
| 4.5.4 BMDCs 负载 VP1-VP4 融合蛋白之后激活 T 细胞产生 IL-17 的水平 | 第66-68页 |
| 5 讨论 | 第68-73页 |
| 5.1 抑制剂的作用原理 | 第68页 |
| 5.2 激光共聚焦荧光显微镜观察 BMDCs 对 VP1-VP4 抗原的加工处理 | 第68-69页 |
| 5.3 流式细胞术分析 BMDCs 负载 VP1-VP4 重组蛋白后的活化状态 | 第69-70页 |
| 5.4 负载 VP1-VP4 蛋白的 BMDCs 对淋巴结 T 细胞的活化作用 | 第70-71页 |
| 5.5 小结：负载 VP1-VP4 蛋白的 BMDCs 抗原提呈机制 | 第71-73页 |
| 6 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
