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激素在水稻与病原菌互作中的作用机制探索及抗病相关基因OsDR10的功能分析

中文摘要第7-9页
Abstract第9-10页
缩略词表第11-12页
1 前言第12-32页
    1.1 我国水稻的主要病害第12-13页
    1.2 水稻抗病基因和抗病相关基因的研究现状第13-15页
        1.2.1 水稻抗病基因研究进展第14页
        1.2.2 水稻抗病相关基因研究进展第14-15页
    1.3 植物与病原的互作第15-19页
        1.3.1 植物免疫系统第16-18页
        1.3.2 植物获得性抗性第18-19页
    1.4 植物的抗病信号路径第19-21页
        1.4.1 水杨酸抗病信号路径第19-20页
        1.4.2 茉莉酸抗病信号路径第20-21页
    1.5 生长素与植物-病原互作第21-26页
        1.5.1 生长素的合成途径第21-23页
        1.5.2 生长素的信号路径第23-24页
        1.5.3 生长素在植物抗病反应中的作用第24-26页
    1.6 植物中的GH3基因家族第26-30页
        1.6.1 GH3家族基因的分类第26-27页
        1.6.2 GH3基因家族蛋白的生化功能第27-29页
        1.6.3 GH3基因家族的生理功能第29-30页
    1.7 研究的目的与意义第30-32页
2 材料与方法第32-45页
    2.1 水稻材料与来源第32页
    2.2 菌株及用途第32-33页
    2.3 病原菌培养、水稻材料接种及病情调查第33页
        2.3.1 白叶枯病菌的培养、接种、病情调查及细菌菌体计数第33页
        2.3.2 细条病菌的培养及细菌菌体计数第33页
    2.4 病原菌激素的抽提及定量分析第33-34页
    2.5 β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色第34页
    2.6 OsDR10免疫组织化学分析第34-36页
        2.6.1 OsDR10蛋白抗体制备第34-35页
        2.6.2 水稻总蛋白抽提第35页
        2.6.3 Western Blot杂交分析第35-36页
        2.6.4 免疫组织化学检测第36页
    2.7 种子萌发能力检测第36-37页
    2.8 OsDR10蛋白筛选酵母双杂交文库第37-38页
        2.8.1 酵母双杂交载体构建第37页
        2.8.2 酵母双杂交第37-38页
    2.9 载体构建及农杆菌介导的遗传转化第38-41页
        2.9.1 OsGH3.9基因结构分析第38页
        2.9.2 OsGH3.9超量表达载体构建第38-40页
        2.9.3 OsGH3.9抑制表达载体构建第40页
        2.9.4 农杆菌介导的遗传转化第40-41页
    2.10 外源激素处理水稻材料第41页
        2.10.1 离体水稻叶片的处理第41页
        2.10.2 活体水稻叶片的处理第41页
    2.11 DNA抽提与阳性检测第41-42页
    2.12 基因表达量分析第42-45页
        2.12.1 RNA抽提及反转录第42页
        2.12.2 反转录PCR(RT-PCR)第42页
        2.12.3 实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR)第42-43页
        2.12.4 水稻抗感病品种接种病原菌的cDNA材料及来源第43-45页
3 结果与分析第45-74页
    3.1 OsGH3家族基因响应激素的功能分析第45-62页
        3.1.1 OsGH3家族基因在外源激素处理后的表达变化第45-51页
        3.1.2 OsGH3家族基因在病原菌侵染的水稻材料中的表达变化第51-53页
        3.1.3 OsGH3.9超量和抑制表达材料表型分析第53-62页
    3.2 病原菌激素合成与分泌检测第62-64页
    3.3 抗病相关基因OsDR10基因的功能分析第64-74页
        3.3.1 OsDR10基因的GUS染色结果与分析第64-65页
        3.3.2 免疫组织化学检测结果与分析第65-69页
        3.3.3 OsDR10超量和抑制表达植株的种子休眠检测第69-72页
        3.3.4 OsDR10蛋白的酵母双杂交文库筛选第72-74页
4 讨论第74-79页
    4.1 OsGH3.9 可能不参与水稻对白叶枯病菌的防卫反应第74-75页
    4.2 OsGH3家族的抗病相资源发掘方向第75-76页
    4.3 干扰病原菌生长素的合成可以降低其毒性第76页
    4.4 OsDR10可能通过与抗病基因xa5的等位基因互作参与水稻防卫反应第76-79页
5 参考文献第79-100页
附录第100-102页
    附录1:部分实验的详细操作程序第100-101页
        Protocol 1: 小样法抽提植物DNA第100页
        Protocol 2: 病原菌分泌的激素抽提第100-101页
    附录2:在读期间发表论文第101-102页
致谢第102页

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