| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略语 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 DNA甲基化 | 第14-16页 |
| 1.2 DNA甲基化与癌症 | 第16-18页 |
| 1.3 肝癌 | 第18-19页 |
| 1.4 NFAT与肝癌 | 第19-21页 |
| 第二章 肝癌中NFAT2基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究 | 第21-55页 |
| 2.1 研究目的、方法及实验方案的设计、意义 | 第21-24页 |
| 2.1.1 研究的背景及目的 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验方法及技术 | 第22-24页 |
| 2.1.2.1 聚合酶链式反应（PCR） | 第22页 |
| 2.1.2.2 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) | 第22页 |
| 2.1.2.3 亚硫酸氢盐测序（BSP） | 第22-23页 |
| 2.1.2.4 蛋白质免疫印迹（WB） | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验方案 | 第24页 |
| 2.1.4 本研究的意义 | 第24页 |
| 2.2 对NFAT2在肝癌组织较癌旁组织表达下降的验证 | 第24-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 研究对象 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2.1.4 引物 | 第25页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.2.1 组织标本的获取及储存 | 第26页 |
| 2.2.2.2 组织标本总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 组织标本蛋白质的提取 | 第27页 |
| 2.2.2.4 RNA逆转录 | 第27-28页 |
| 2.2.2.5 肝癌及癌旁组织中NFAT2表达的qRT-PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.2.6 肝癌及癌旁组织中NFAT2表达的Western Blot检测 | 第29-31页 |
| 2.2.2.7 统计学处理 | 第31页 |
| 2.2.3 实验结果 | 第31-32页 |
| 2.2.3.1 肝癌及癌旁组织NFAT2 mRNA表达的差异 | 第31-32页 |
| 2.2.3.2 肝癌及癌旁组织NFAT2蛋白表达的差异 | 第32页 |
| 2.2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.3 对肝癌中NFAT2基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究 | 第33-48页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.3.1.1 研究对象 | 第33页 |
| 2.3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.3.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.3.1.4 引物 | 第34页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第34-44页 |
| 2.3.2.1 组织标本的获取及储存 | 第34页 |
| 2.3.2.2 细胞培养 | 第34-36页 |
| 2.3.2.3 组织标本基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.2.4 细胞系基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.3.2.5 DNA的亚硫酸氢盐修饰 | 第38-40页 |
| 2.3.2.6 NFAT2基因启动子区域片段的PCR扩增 | 第40页 |
| 2.3.2.7 PCR产物纯化与回收 | 第40-42页 |
| 2.3.2.8 重组载体构建 | 第42页 |
| 2.3.2.9 转化与克隆 | 第42-44页 |
| 2.3.2.10 测序后数据分析 | 第44页 |
| 2.3.2.11 统计学处理 | 第44页 |
| 2.3.3 实验结果 | 第44-47页 |
| 2.3.3.1 单个病人的NFAT2基因启动子Cp G岛甲基化状态 | 第44-45页 |
| 2.3.3.2 全部病人癌旁组织和癌组织NFAT2基因启动子CpG岛甲基化比较 | 第45-46页 |
| 2.3.3.3 L02人正常肝细胞系与HuH7、HepG2、Hep3B人肝癌细胞系NFAT2基因启动子CpG岛甲基化比较 | 第46页 |
| 2.3.3.4 癌组织NFAT2基因启动子CpG岛甲基化与相应mRNA表达水平相关性研究 | 第46-47页 |
| 2.3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 2.4 药物对肝癌NFAT2基因启动子区去甲基化作用的研究 | 第48-55页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 2.4.1.1 研究对象 | 第48页 |
| 2.4.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 2.4.1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 2.4.1.4 引物 | 第49页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.4.2.1 细胞培养 | 第49页 |
| 2.4.2.2 细胞加药实验 | 第49-50页 |
| 2.4.2.3 细胞系总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.4.2.4 细胞系蛋白质的提取 | 第51-52页 |
| 2.4.2.5 RNA逆转录 | 第52页 |
| 2.4.2.6 各细胞系中NFAT2基因表达的qRT-PCR检测 | 第52页 |
| 2.4.2.7 各细胞系中NFAT2蛋白表达的Western Blot检测 | 第52页 |
| 2.4.2.8 统计学处理 | 第52页 |
| 2.4.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 2.4.3.1 人正常肝细胞系与肝癌细胞系中NFAT2 mRNA表达的差异 | 第52-53页 |
| 2.4.3.2 甲基化酶抑制剂（5-aza-dC）对PLC肝癌细胞系NFAT2mRNA表达的影响 | 第53-54页 |
| 2.4.3.3 甲基化酶抑制剂（5-aza-dC）对PLC肝癌细胞系NFAT2蛋白表达的影响 | 第54页 |
| 2.4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 结论和展望 | 第55-56页 |
| 3.1 主要结论 | 第55页 |
| 3.2 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 | 第64页 |
