| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 烯键还原酶 | 第13-19页 |
| 1.1.1 烯键还原酶催化底物类型 | 第13-16页 |
| 1.1.2 烯键还原酶的催化机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3 烯键还原酶最新研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2 辅酶再生 | 第19-22页 |
| 1.2.1 全细胞法 | 第20页 |
| 1.2.2 酶法 | 第20-21页 |
| 1.2.3 电化学法 | 第21页 |
| 1.2.4 光化学法 | 第21-22页 |
| 1.3 交联酶聚集体技术 | 第22-24页 |
| 1.3.1 交联酶聚集体的应用 | 第24页 |
| 1.3.1.1 单酶固定化 | 第24页 |
| 1.3.1.2 多酶固定化 | 第24页 |
| 1.4 本论文的研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 BS1K 的表达研究 | 第26-34页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂和药品 | 第26页 |
| 2.1.3 仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 BS1K 的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.2 BS1K 表达条件的优化 | 第27页 |
| 2.2.3 BSIK 的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 蛋白含量的测定 | 第28页 |
| 2.2.5 酶活力的测定 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-33页 |
| 2.3.1 目的基因的表达 | 第29页 |
| 2.3.2 诱导温度对 BS1K 表达的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.3 IPTG 浓度对 BS1K 表达的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.4 诱导时间对 BS1K 表达的影响 | 第31-33页 |
| 2.3.5 BS1K 的表达纯化 | 第33页 |
| 2.4 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 BS1K 催化碳碳双键还原的研究 | 第34-48页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第34页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 BS1K 催化碳碳双键还原反应 | 第34-35页 |
| 3.3.1.1 BS1K 催化还原α，β-不饱和羰基化合物 | 第35页 |
| 3.3.1.2 BS1K 催化还原α，β-不饱和酸及其衍生物 | 第35页 |
| 3.3.1.3 BS1K 催化还原α，β-不饱和硝基化合物 | 第35页 |
| 3.3.2 BS1K 催化还原前手性化合物 | 第35-36页 |
| 3.3.3 转化率的确定 | 第36页 |
| 3.3.4 产物构型的确立 | 第36页 |
| 3.3.5 产物光学纯度的确定 | 第36页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第36-46页 |
| 3.4.1 BS1K 催化还原α，β-不饱和羰基化合物 | 第36-38页 |
| 3.4.2 BS1K 催化反应条件优化 | 第38-41页 |
| 3.4.2.1 酶浓度的选择 | 第38-39页 |
| 3.4.2.2 NADH 浓度的选择 | 第39-40页 |
| 3.4.2.3 缓冲液的选择 | 第40页 |
| 3.4.2.4 底物浓度的选择 | 第40-41页 |
| 3.4.2.5 温度的选择 | 第41页 |
| 3.4.3 BS1K 催化还原α，β-不饱和硝基及硝基醇化合物 | 第41-43页 |
| 3.4.4 BS1K 催化还原α，β-不饱和酸及酯 | 第43-44页 |
| 3.4.5 BS1K 催化还原前手性化合物 | 第44-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-48页 |
| 第四章 辅酶再生研究 | 第48-53页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料和仪器 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.3.1 酶法再生 | 第48-49页 |
| 4.3.2 歧化反应 | 第49页 |
| 4.3.3 测定方法 | 第49页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 4.4.1 辅酶再生催化还原反应 | 第49-50页 |
| 4.4.2 辅酶再生催化优化 | 第50-52页 |
| 4.4.2.1 NAD+的添加量的优化 | 第50-51页 |
| 4.4.2.2 GDH 的添加量的优化 | 第51-52页 |
| 4.4.3 歧化反应结果 | 第52页 |
| 4.5 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 烯键还原酶 BS1K 的固定化研究 | 第53-64页 |
| 5.1 材料和仪器 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 5.2.1 BS1K 单独固定化 | 第53页 |
| 5.2.2 BS1K 与 GDH 共固定化 | 第53-54页 |
| 5.3 酶活的测定 | 第54页 |
| 5.4 活力回收 | 第54页 |
| 5.5 转化率的测定 | 第54-55页 |
| 5.6 结果与讨论 | 第55-62页 |
| 5.6.1 BS1K 单酶固定化（CLEAs-BS1K) | 第55-58页 |
| 5.6.1.1 沉淀剂的选择 | 第55页 |
| 5.6.1.2 硫酸铵浓度的选择 | 第55-56页 |
| 5.6.1.3 戊二醛浓度的选择 | 第56页 |
| 5.6.1.4 交联时间的选择 | 第56-57页 |
| 5.6.1.5 CLEAs-BS1K 催化反应 | 第57-58页 |
| 5.6.2 BS1K-GDH 双酶共固定化（Combi-CLEAs） | 第58-62页 |
| 5.6.2.1 沉淀剂的选择 | 第58-59页 |
| 5.6.2.2 硫酸铵浓度的选择 | 第59-60页 |
| 5.6.2.3 沉淀时间的选择 | 第60页 |
| 5.6.2.4 戊二醛浓度的选择 | 第60-61页 |
| 5.6.2.5 交联时间的选择 | 第61-62页 |
| 5.6.3 固定化酶重复使用次数 | 第62页 |
| 5.7 小结 | 第62-64页 |
| 第六章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
