| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 1 材料与试剂 | 第18-28页 |
| 1.1 人胚胎神经干细胞来源 | 第18页 |
| 1.2 EphB4沉默慢病毒与过表达慢病毒的构建 | 第18-19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19-21页 |
| 1.4 抗体 | 第21-22页 |
| 1.5 主要仪器与耗材 | 第22-23页 |
| 1.6 主要溶液的配制 | 第23-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.1 人胚胎神经干细胞培养 | 第28页 |
| 2.2 人胚胎神经干细胞鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 嘌呤霉素使用浓度筛选 | 第29页 |
| 2.4 慢病毒转染 | 第29-30页 |
| 2.5 PT-PCR检测mRNA水平 | 第30-31页 |
| 2.5.1 总RNA提取 | 第30页 |
| 2.5.2 反转录 | 第30-31页 |
| 2.5.3 RT-PCR反应 | 第31页 |
| 2.6 Western Blot检测蛋白表达水平 | 第31-33页 |
| 2.6.1 蛋白提取 | 第31页 |
| 2.6.2 蛋白定量（采用BCA蛋白定量方法） | 第31-32页 |
| 2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.6.4 封闭及抗体反应 | 第33页 |
| 2.6.5 ECL（增强化学发光）显色 | 第33页 |
| 2.7 免疫荧光分析 | 第33-39页 |
| 2.7.1 细胞处理及固定 | 第33-34页 |
| 2.7.2 BrdU标记检测增殖 | 第34页 |
| 2.7.3 Nestin免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 2.7.4 Dcx免疫荧光染色 | 第35页 |
| 2.7.5 β Ⅲ-tubulin免疫荧光染色 | 第35-36页 |
| 2.7.6 GFAP免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 2.7.7 Galc免疫荧光染色 | 第37页 |
| 2.7.8 NG2免疫荧光染色 | 第37-38页 |
| 2.7.9 Cleaved-caspase 3 与Caspase 8 免疫荧光染色 | 第38页 |
| 2.7.10 Ki67免疫荧光染色 | 第38-39页 |
| 2.8 克隆分析 | 第39页 |
| 2.9 AnnexinⅤ-PE/7AAD流式试剂盒检测凋亡 | 第39页 |
| 2.10 细胞周期分析 | 第39-40页 |
| 2.11 抑制剂和激动剂使用方法 | 第40-42页 |
| 2.12 细胞冻存 | 第42页 |
| 2.13 统计方法 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-77页 |
| 3.1 人胚胎神经干细胞鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.2 慢病毒转染系统的建立.. | 第43-45页 |
| 3.3 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞的自我更新及增殖的影响 | 第45-48页 |
| 3.3.1 EphB4沉 默及过表达对人胚胎神经干细胞自我更新的影响 | 第45-47页 |
| 3.3.2 EphB4沉 默及过表达对人胚胎神经干细胞增殖的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 EphB4沉 默及过表达对人胚胎神经干细胞分化的影响 | 第48-56页 |
| 3.4.1 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞分化为成神经细胞的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.2 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞分化为神经元的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.3 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞分化为星形胶质细胞的影响 | 第52-54页 |
| 3.4.4 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞分化为少突胶质前体细胞的影响 | 第54-56页 |
| 3.5 EphB4沉 默及过表达对人胚胎神经干细胞凋亡的影响 | 第56-61页 |
| 3.5.1 EphB4沉默及过表达对Cleaved-caspase3标记的凋亡细胞的影响 | 第56-57页 |
| 3.5.2 EphB4沉默及过表达对Caspase8标记的凋亡细胞的影响 | 第57-59页 |
| 3.5.3 Annexin Ⅴ-PE /7-AAD流式试剂盒检测EphB4沉默及过表达对细胞凋亡的影响 | 第59-61页 |
| 3.6 EphB4调节人胚胎神经干细胞自我更新与增殖的下游机制探索 | 第61-75页 |
| 3.6.1 EphB4沉默及过表达对人胚胎神经干细胞细胞周期的影响 | 第61-62页 |
| 3.6.2 EphB4沉默及过表达对G1期细胞周期蛋白的影响 | 第62-64页 |
| 3.6.3 CyclinD1/CDK4抑制剂FAS的作用 | 第64-66页 |
| 3.6.4 CyclinD1/CDK4介导了Eph B4调节人胚胎神经干细胞增殖的作用 | 第66-68页 |
| 3.6.5 EphB4沉默及过表达对Abl蛋白的影响 | 第68-69页 |
| 3.6.6 Abl抑制剂Gleevec的作用 | 第69-71页 |
| 3.6.7 Abl介导EphB4-CyclinD1/CDK4信号通路 | 第71-73页 |
| 3.6.8 Abl激动剂DPH的作用 | 第73-75页 |
| 3.7 EphB4-Abl-CyclinD1/CDK4信号通路对分化的影响 | 第75-77页 |
| 3.7.1 EphB4-Abl-CyclinD1/CDK4信号通路对人胚胎神经干细胞向神经元分化的影响 | 第75-76页 |
| 3.7.2 EphB4-Abl-CyclinD1/CDK4信号通路对人胚胎神经干细胞向胶质细胞分化的影响 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 文献综述 | 第93-116页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 个人简历 | 第119页 |
