| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 必特螺旋霉素概述 | 第10-11页 |
| 1.2 Lrp蛋白的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 lrp基因的发现及鉴定 | 第12页 |
| 1.2.2 Lrp对菌体生长、生理功能的调控 | 第12-16页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第16-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-30页 |
| 2.1.1 生物信息学分析工具 | 第16页 |
| 2.1.2 基因 | 第16-17页 |
| 2.1.3 质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.4 菌株 | 第18-19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19-21页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第21页 |
| 2.1.7 工具酶与试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.8 培养基配方 | 第23-26页 |
| 2.1.9 常用试剂配方 | 第26-28页 |
| 2.1.10 实验仪器 | 第28-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-44页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.3 DNA片段切胶纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.5 DNA与质粒连接和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 转化子鉴定 | 第33页 |
| 2.2.7 链霉菌原生质体制备、再生与DNA转化至链霉菌原生质体 | 第33-34页 |
| 2.2.8 菌体破碎与蛋白纯化 | 第34页 |
| 2.2.9 酶切反应 | 第34-35页 |
| 2.2.10 发酵液上清萃取 | 第35页 |
| 2.2.11 构建E. coli BL21(DE3)/pET28a-acyB2; pET28a-lrp; pET28a-bldD蛋白表达菌株 | 第35页 |
| 2.2.12 在E. coli BL21(DE3)中表达AcyB2、Lrp、BldD蛋白 | 第35-36页 |
| 2.2.13 构建E. coli BL21(DE3) /pKJE7/pET28a-acyB2菌株并表达AcyB2蛋白 | 第36页 |
| 2.2.14 构建E. coli JM109/pQE9-bldD、pQE9-lrp蛋白表达菌株 | 第36页 |
| 2.2.15 在E. coli JM1 09中表达Lrp、BldD蛋白 | 第36-37页 |
| 2.2.16 Srm22蛋白表达 | 第37页 |
| 2.2.17 EMSA实验 | 第37-38页 |
| 2.2.18 构建含CRISPR/Cas系统的lrp改造片段重组质粒 | 第38-39页 |
| 2.2.19 构建△lrp-SP变株 | 第39-40页 |
| 2.2.20 △lrp-SP变株与S.spiramyceticus 1941原株发酵产物检测 | 第40页 |
| 2.2.21 制备△lrp-SP变株与S.spiramyceticus 1941原生质体并转化pWHM3-ist-ist质粒 | 第40页 |
| 2.2.22 △lrp-BT变株与S.spiramyceticus 1941-BT变株必特螺旋霉素检测 | 第40页 |
| 2.2.23 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941原株氨基酸含量检测 | 第40-41页 |
| 2.2.24 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941原株转录组检测 | 第41页 |
| 2.2.25 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941原株QPCR检测 | 第41-42页 |
| 2.2.26 △orf21发酵产物检测 | 第42-43页 |
| 2.2.27 鉴定△orf21发酵萃取产物 | 第43页 |
| 2.2.28 半制备△orf21发酵产物 | 第43页 |
| 2.2.29 ~(13)C NMR与~1H NMR | 第43-44页 |
| 第3章 实验结果 | 第44-68页 |
| 3.1 BT生物合成基因簇与lrp、bldD基因的生物信息学分析 | 第44-46页 |
| 3.2 构建Lrp、BldD、AcyB2与Srm22表达载体 | 第46-47页 |
| 3.3 Lrp、BldD、AcyB2与Srm22蛋白表达 | 第47-50页 |
| 3.3.1 AcyB2蛋白表达 | 第48页 |
| 3.3.2 Lrp蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.3.3 BldD蛋白表达 | 第49-50页 |
| 3.3.4 Srm22蛋白表达 | 第50页 |
| 3.4 获得推测的Lrp、BldD与Srm22结合靶序列 | 第50-51页 |
| 3.5 EMSA实验 | 第51-55页 |
| 3.6 构建△lrp-SP变株及验证 | 第55-56页 |
| 3.7 △lrp-SP变株与 spiramyceticus 1941发酵产物检测 | 第56-58页 |
| 3.8 制备△lrp-SP变株原生质体并导入ist基因 | 第58页 |
| 3.9 △lrp-BT变株与S. spiramyceticus 1941-BT变株发酵产物的检测 | 第58-60页 |
| 3.10 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941中氨基酸的含量检测 | 第60-63页 |
| 3.11 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941原株转录组检测 | 第63-64页 |
| 3.12 △lrp-SP变株与S. spiramyceticus 1941原株QPCR检测 | 第64-65页 |
| 3.13 参与BT福洛氨糖生物合成基因功能的鉴定 | 第65-68页 |
| 3.13.1 构建orf21基因阻断株 | 第65页 |
| 3.13.2 △orf21突变株发酵产物的鉴定 | 第65-67页 |
| 3.13.3 △orf21突变株中螺旋霉素类似物的纯化和化学结构鉴定 | 第67-68页 |
| 第4章 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 总结 | 第71-72页 |
| 论文创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 英文缩写说明 | 第76-78页 |
| 氨基酸缩写说明 | 第78-79页 |
| 附录1 | 第79-80页 |
| 论文发表 | 第80-81页 |
| 学术会议 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
