| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 先天缺牙的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2 MSX1基因结构及其功能 | 第11-12页 |
| 1.3 CRISPR-Cas9基因编辑技术简介 | 第12-13页 |
| 1.4 CRISPR-Cas9基因编辑技术的推广运用 | 第13页 |
| 1.5 研究方法与研究目的 | 第13-15页 |
| 第2章 材料和方法 | 第15-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验细胞来源 | 第15页 |
| 2.1.2 实验仪器设备 | 第15页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-36页 |
| 2.2.1. pX330-MSX1K0-sgRNA质粒的构建 | 第16-21页 |
| 2.2.2 重组质粒donor的构建 | 第21-25页 |
| 2.2.3 Cas9切割效率检测 | 第25-27页 |
| 2.2.4 MSX1基因敲除人胚胎干细胞（hESc）系的构建 | 第27-31页 |
| 2.2.5 MSX1基因敲除hESc的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 H1-MSX1-DKO细胞拟胚体（EB）的形成及分化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR（real-time qPCR）检测 | 第33-36页 |
| 第3章 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.1 质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.1 pX330-MSX1-sgRNA质粒测序鉴定 | 第36页 |
| 3.1.2 上下游同源臂PCR产物电泳结果 | 第36页 |
| 3.1.3 重组质粒pUC57-LA-PURO-MSX1测序结果 | 第36-37页 |
| 3.1.4 重组质粒donor的测序结果 | 第37页 |
| 3.2 Cas9切割效率检测实验 | 第37-38页 |
| 3.2.1 MSX1-GFP-reporter测序结果 | 第37页 |
| 3.2.2 不同实验组 293T细胞钙转后发光情况 | 第37页 |
| 3.2.3 流式细胞实验定量检测各组细胞的发光情况 | 第37-38页 |
| 3.3 MSX1基因敲除hESc系的构建及鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.1 电转化过程细胞的形态 | 第38-39页 |
| 3.3.2 单克隆细胞基因组PCR产物电泳结果 | 第39-40页 |
| 3.4 H1-MSX1-DKO细胞系鉴定 | 第40页 |
| 3.4.1 H1-MSX1-DKO细胞核型 | 第40页 |
| 3.4.2 流式细胞实验鉴定H1-MSX1-DKO细胞的多能性 | 第40页 |
| 3.5 H1-MSX1-DKO细胞分化能力检测 | 第40-42页 |
| 3.5.1 H1-MSX1-DKO细胞拟胚体（EB）的形成 | 第40-41页 |
| 3.5.2 EB三胚层分化能力检测 | 第41-42页 |
| 第4章 讨论 | 第42-44页 |
| 第5章 结论与展望 | 第44-45页 |
| 5.1 结论 | 第44页 |
| 5.2 进一步研究计划 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第51-52页 |
| 综述 MSX1基因与先天缺牙关系的研究进展 | 第52-59页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
