| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| ·IGFs 家族概况 | 第11页 |
| ·IGF2 基因的研究进展 | 第11-14页 |
| ·IGF-1R 介导 IGF2 的促增殖作用 | 第11-13页 |
| ·IR-A 介导 IGF2 的促增殖作用 | 第13页 |
| ·IGF2 的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·肌卫星细胞的研究进展 | 第14-17页 |
| ·肌卫星细胞的分离纯化 | 第14-16页 |
| ·肌卫星细胞的增殖与分化 | 第16-17页 |
| ·生长因子对肌卫星细胞调节作用 | 第17页 |
| ·细胞转基因方法研究进展 | 第17-18页 |
| ·病毒转染法 | 第17-18页 |
| ·物理转染方法 | 第18页 |
| ·化学转染方法 | 第18页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| ·研究目的 | 第18-19页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 IGF2 真核表达载体的构建及鉴定 | 第20-29页 |
| 前言 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·主要试验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·绵羊皮肤成纤维细胞 RNA 提取 | 第21页 |
| ·总 RNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第21页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·IGF2 基因 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·pEGFP–N1-IGF2 真核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·pEGFP–N1 EcoRI/BamHI 双酶切 | 第22页 |
| ·DNA 胶回收 | 第22页 |
| ·载体连接及转化 | 第22-23页 |
| ·阳性菌落的筛选及鉴定 | 第23页 |
| ·质粒提取方法 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-27页 |
| ·绵羊成纤维细胞总 RNA 提取 | 第23-24页 |
| ·IGF2 基因的扩增结果 | 第24页 |
| ·pEGFP- N1-IGF2 重组载体鉴定结果 | 第24-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 绵羊骨骼肌肌卫星细胞的原代培养及鉴定 | 第29-38页 |
| 前言 | 第29页 |
| ·材料和方法 | 第29-33页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29页 |
| ·主要试验材料 | 第29页 |
| ·主要试剂配制 | 第29-30页 |
| ·肌卫星细胞的分离纯化 | 第30-31页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的培养及诱导分化 | 第31页 |
| ·肌卫星细胞生长曲线的绘制 | 第31页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的冻存与复苏 | 第31-32页 |
| ·肌卫星细胞总 RNA 的提取、cDNA 第一链的合成 | 第32页 |
| ·肌卫星细胞的鉴定 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·肌卫星细胞的分离纯化培养及肌管诱导 | 第33-34页 |
| ·肌卫星细胞生长曲线的绘制 | 第34-35页 |
| ·骨骼肌卫星细胞总 RNA 提取 | 第35页 |
| ·骨骼肌细胞的鉴定 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-38页 |
| 第四章 IGF2 转染绵羊骨骼肌细胞及其促增殖作用 | 第38-48页 |
| 前言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·主要试验材料 | 第38页 |
| ·各种溶液配制 | 第38-39页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞筛选条件的优化 | 第39页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞转染条件的优化 | 第39页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞转染 | 第39-40页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞稳定转染筛选 | 第40页 |
| ·纸片法结合极限稀释法挑选阳性克隆 | 第40页 |
| ·稳定转染的肌细胞总 RNA 的提取 | 第40页 |
| ·cDNA 第一链的合成及 SQ RT-PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·细胞周期分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞筛选条件的优化 | 第41页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞转染条件的优化 | 第41-42页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞稳定转染筛选及单克隆化 | 第42-43页 |
| ·SQ RT-PCR 检测 IGF2 对肌细胞增殖的作用 | 第43-44页 |
| ·细胞周期分析结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
