| 前 言 | 第9-17页 |
| 第一篇 小鼠B7-1基因转染肝癌细胞诱导的抗瘤效应研究 | 第17-43页 |
| 第一章 重组质粒的构建 | 第17-28页 |
| 1.1 材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 动物 | 第17页 |
| 1.1.2 主要仪器与设备 | 第17-18页 |
| 1.2 方法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第18页 |
| 1.2.2 小鼠脾细胞mRNA的提取 | 第18-19页 |
| 1.2.3 目的基因的获得 | 第19-20页 |
| 1.3 连接反应 | 第20-21页 |
| 1.3.1 制备目的基因片段及载体 | 第20页 |
| 1.3.2 1.5ml Ep管中建立连接反应 | 第20页 |
| 1.3.3 琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第20-21页 |
| 1.4 重组质粒的转化 | 第21-22页 |
| 1.5 质粒的制备 | 第22-26页 |
| 1.5.1 试剂与配制 | 第22-23页 |
| 1.5.2 质粒的小量提取 | 第23-25页 |
| 1.5.3 质粒的大量提取 | 第25-26页 |
| 1.6 质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| 1.7 目的基因序列的测定 | 第27页 |
| 1.8 结果 | 第27-28页 |
| 第二章 脂质体介导B7-1基因转染小鼠肝癌细胞 | 第28-32页 |
| 2.1 材料 | 第28页 |
| 2.1.1 细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂与设备 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 细胞复苏与培养 | 第28-29页 |
| 2.2.2 转染质粒的制备 | 第29页 |
| 2.2.3 脂质体介导的真核细胞转染 | 第29-30页 |
| 2.2.4 B7-1分子表达的检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-32页 |
| 第三章 B7-1基因诱导的小鼠抗瘤效应的研究 | 第32-43页 |
| 3.1 淋巴细胞增殖指数的测定 | 第32-33页 |
| 3.1.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.2 方法 | 第32-33页 |
| 3.2 CTLs的诱导及其杀伤活性的检测 | 第33-34页 |
| 3.2.1 材料 | 第33页 |
| 3.2.2 方法 | 第33-34页 |
| 3.3 皮下接种后肿瘤生长情况的观察 | 第34-35页 |
| 3.4 统计学处理 | 第35页 |
| 3.5 结果 | 第35-43页 |
| 3.5.1 肿瘤细胞中B7-1分子的表达对淋巴细胞增殖效应的影响 | 第35页 |
| 3.5.2 表达B7-1分子的H22-mB7-1细胞诱导的CTL杀伤活性 | 第35页 |
| 3.5.3 肿瘤细胞在体内成瘤能力和生长速度 | 第35-43页 |
| 第二篇 人B7-1基因转染肝癌细胞诱导的抗瘤效应研究 | 第43-63页 |
| 第一章 PRCCMV-B7重组质粒制备与鉴定 | 第43-50页 |
| 1.1 重组质粒制备 | 第43-48页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第43-46页 |
| 1.1.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 1.2 重组质粒鉴定 | 第48-50页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 第二章 人肝癌细胞培养 | 第50-53页 |
| 2.1 培养设施及材料 | 第50-51页 |
| 2.1.1 基本设施 | 第50页 |
| 2.1.2 培养材料 | 第50-51页 |
| 2.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.2.1 肝癌细胞复苏 | 第51页 |
| 2.2.2 肝癌细胞培养 | 第51-53页 |
| 第三章 脂质体介导质粒转移构建新的细胞株 | 第53-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第53页 |
| 3.2 实验过程 | 第53-56页 |
| 3.2.1 确立选择系统 | 第53-54页 |
| 3.2.2 脂质体载体介导DNA转移 | 第54-56页 |
| 第四章 B7转导细胞株鉴定 | 第56-60页 |
| 4.1 B7+smmc7721细胞基因组DNA提取，电泳回收PCR反应 | 第56-58页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.1.2 实验步骤 | 第56-58页 |
| 4.2 B7+smmc7721细胞mRNA提取及反转录PCR | 第58-60页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.2 实验步骤 | 第59-60页 |
| 第五章 联合IL-2的LAK-C对两种肝癌细胞杀伤活性对照 | 第60-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.3 结论 | 第62-63页 |
| 讨论 | 第63-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 博士期间发表论文 | 第73-74页 |
| 中文摘要 | 第74-77页 |
| 英文摘要 | 第77页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 吉林大学博士学位论文原创性声明 | 第82页 |
