| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 斑马鱼概述 | 第11-12页 |
| 1.2 生物钟概述 | 第12页 |
| 1.3 生物钟紊乱与疾病 | 第12-13页 |
| 1.4 生物钟的分子机制 | 第13-14页 |
| 1.5 斑马鱼生物钟基因 | 第14-15页 |
| 1.6 e4bp4-2b基因 | 第15-22页 |
| 1.6.1 E4bp4和自然杀伤细胞（NK cell） | 第15-16页 |
| 1.6.2 E4bp4和常规树突状细胞CD8a+（CD8a+ cDCs） | 第16-17页 |
| 1.6.3 E4bp4和B细胞 | 第17页 |
| 1.6.4 E4bp4和巨噬细胞 | 第17页 |
| 1.6.5 E4bp4和T辅助细胞的反应 | 第17-19页 |
| 1.6.6 E4bp4和一些信号通路 | 第19页 |
| 1.6.7 PAR家族和E4bp4 | 第19-21页 |
| 1.6.8 PAR家族和E4bp4在生物钟中的作用 | 第21-22页 |
| 1.6.9 斑马鱼中的E4bp4 | 第22页 |
| 1.7 TALEN技术及在斑马鱼上的应用 | 第22-24页 |
| 1.8 立题意义及主要研究内容更 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器及来源 | 第25-26页 |
| 2.3 实验试剂及来源 | 第26-27页 |
| 2.4 缓冲液及常用试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.4.1 核酸琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第27页 |
| 2.4.2 细菌培养基及抗生素 | 第27页 |
| 2.4.3 Inoue法制备超级感受态细胞相关溶液 | 第27页 |
| 2.4.4 原位杂交相关溶液 | 第27-28页 |
| 2.4.5 其他溶液 | 第28页 |
| 2.5 引物设计及合成 | 第28-31页 |
| 2.6 实验设计与方法 | 第31-49页 |
| 2.6.1 斑马鱼胚胎的收集 | 第31页 |
| 2.6.2 荧光素酶报告载体的构建 | 第31-36页 |
| 2.6.2.1 斑马鱼基因组（DNA）的提取 | 第31-32页 |
| 2.6.2.2 PCR | 第32页 |
| 2.6.2.3 胶回收PCR产物 | 第32-33页 |
| 2.6.2.4 双酶切启动子片段和 p GL4.17 载体 | 第33页 |
| 2.6.2.5 目的启动子片段连接到 p GL4.17 载体上 | 第33-34页 |
| 2.6.2.6 Inoue 法超级感受态细胞制备 | 第34页 |
| 2.6.2.7 转化 | 第34页 |
| 2.6.2.8 转化实验重组体的 PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| 2.6.2.9 重组质粒的提取 | 第35页 |
| 2.6.2.10 重组质粒双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.6.3 表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.6.4 利用TALEN构建e4bp4-2b斑马鱼突变体 | 第38-40页 |
| 2.6.5 荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 2.6.6 斑马鱼运动行为的检测 | 第41-42页 |
| 2.6.7 Digoxin标记的e4bp4-2b RNA探针的合成 | 第42-43页 |
| 2.6.8.整体原位杂交 (Whole Mount In Situ Hybridization) | 第43-45页 |
| 2.6.9.细胞转染实验 | 第45-46页 |
| 2.6.10.ChIP实验方法 | 第46-47页 |
| 2.6.11.光照处理实验方法 | 第47页 |
| 2.6.12.深度测序 | 第47-48页 |
| 2.6.13 数据统计分析 | 第48-49页 |
| 第三章 结果分析 | 第49-65页 |
| 3.1. e4bp4-2b基因的表达是受生物钟直接调控的。 | 第49-52页 |
| 3.2 e4bp4-2b基因的表达受光的影响。 | 第52-55页 |
| 3.3 e4bp4-2b基因对斑马鱼生物钟基因表达的影响。 | 第55-58页 |
| 3.4 斑马鱼中PAR和E4bp4家族的基因在生物钟中的功能。 | 第58-60页 |
| 3.5 E4bp4-2b对斑马鱼cry1aa基因的影响的深入探究。 | 第60-62页 |
| 3.6 e4bp4-2b突变样品的深度测序。 | 第62-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-69页 |
| 4.1 本文对e4bp4-2b的表达受钟控的研究 | 第65页 |
| 4.2 本文对e4bp4-2b的表达受光控的研究 | 第65-66页 |
| 4.3 e4bp4-2b构建突变体的分析 | 第66页 |
| 4.4 E4bp4-2b对于下游靶基因cry1aa影响的深入探究 | 第66-67页 |
| 4.5 e4bp4-2b深度测序结果的分析 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
