| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 生物钟概述 | 第11页 |
| 1.2 生物钟分子机制 | 第11-12页 |
| 1.3 核心生物与外周生物钟 | 第12-13页 |
| 1.4 生物钟与疾病 | 第13页 |
| 1.5 斑马鱼作为模式生物的优点 | 第13-14页 |
| 1.6 斑马鱼生物钟基因 | 第14页 |
| 1.7 TALEN技术及在斑马鱼上的应用 | 第14-16页 |
| 1.8 PGC-1α | 第16-18页 |
| 1.9 PGC-1α与生物钟 | 第18-19页 |
| 1.10立题意义和主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 实验仪器及来源 | 第21-22页 |
| 2.3 实验试剂及来源 | 第22-23页 |
| 2.4 缓冲液与常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.4.1 核酸琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第23页 |
| 2.4.2 Western Blot相关试剂配制 | 第23页 |
| 2.4.3 细菌培养基及抗生素 | 第23-24页 |
| 2.4.4 Inoue法制备超级感受态细胞相关溶液 | 第24页 |
| 2.4.5 其他溶液 | 第24页 |
| 2.5 引物设计及合成 | 第24-25页 |
| 2.6 实验设计与方法 | 第25-41页 |
| 2.6.0 斑马鱼胚胎的收集 | 第25-26页 |
| 2.6.1 TRIZOL提取斑马鱼胚胎总RNA | 第26页 |
| 2.6.2 cDNA模板的制备 | 第26-27页 |
| 2.6.3 pgc-1α cDNA及启动子克隆 | 第27页 |
| 2.6.4 胶回收 PCR 产物 | 第27-28页 |
| 2.6.5 目的片段连接至pGL4.17-luciferase载体 | 第28页 |
| 2.6.6 Inoue法超级感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| 2.6.7 转化 | 第29页 |
| 2.6.8 转化试验重组体的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.6.9 胚胎显微注射 | 第30-31页 |
| 2.6.10 斑马鱼基因组DNA提取 | 第31页 |
| 2.6.11 荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.6.12 蛋白免疫印迹（Western blot） | 第32-33页 |
| 2.6.13 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP） | 第33-34页 |
| 2.6.14 斑马鱼运动行为的检测 | 第34-35页 |
| 2.6.15 利用TALEN构建pgc-1α斑马鱼突变体 | 第35-37页 |
| 2.6.16 染色体免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP) | 第37-39页 |
| 2.6.17 细胞实验 | 第39页 |
| 2.6.18 荧光素酶报告基因实验 | 第39-40页 |
| 2.6.19 数据统计分析 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第41-59页 |
| 3.1 斑马鱼体内pgc-1α基因表达呈现生物钟节律 | 第41-45页 |
| 3.1.1 利用实时定量PCR检测斑马鱼体内pgc-1α表达情况 | 第41-42页 |
| 3.1.2 斑马鱼体内Pgc-1α蛋白水平呈现生物钟节律 | 第42-43页 |
| 3.1.3 成年斑马鱼体内pgc-1α具有明显的组织特异性 | 第43-44页 |
| 3.1.4 钟基因突变体内pgc-1α表达变化 | 第44-45页 |
| 3.2 pgc-1α直接受斑马鱼体生物钟调控 | 第45-47页 |
| 3.2.1 pgc-1α启动子克隆与ChIP | 第45页 |
| 3.2.2 Clock1a与Bmal1b参与调控pgc-1α | 第45-46页 |
| 3.2.3 Tefa通过结合D-box调控pgc-1α的转录 | 第46-47页 |
| 3.3 斑马鱼pgc-1α突变体制备 | 第47-50页 |
| 3.3.1 TALEN 位点设计 | 第47-48页 |
| 3.3.2 TALEN活性鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 pgc-1α突变体选择类型 | 第49-50页 |
| 3.4 pgc-1α突变体钟基因变化情况及行为节律变化 | 第50-57页 |
| 3.4.1 pgc-1α突变体部分钟基因变化情况 | 第50-52页 |
| 3.4.2 pgc-1α突变体成鱼不同组织中生物钟基因表达变化各不相同 | 第52-54页 |
| 3.4.4 pgc-1α突变体斑马鱼光暗条件下行为节律变化 | 第54-55页 |
| 3.4.5 pgc-1α突变体斑马持续黑暗下行为节律变化 | 第55页 |
| 3.4.6 Pgc-1α增强ROR家族对bmal1b的转录激活效应 | 第55-57页 |
| 3.5 pgc-1α突变体代谢异常 | 第57-58页 |
| 3.6 Pgc-1α在斑马鱼生物钟中的作用机制模式图 | 第58-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 pgc-1α在斑马鱼体内受生物钟直接调控 | 第59页 |
| 4.2 斑马鱼pgc-1α突变体生物钟紊乱 | 第59-60页 |
| 4.3 pgc-1α突变体幼鱼行为活动量高于野生型 | 第60-61页 |
| 4.4 Pgc-1α同样通过Ror家族增强bmal1b转录 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 英文缩略词表 | 第70-71页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
