| 中文摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 中英符号缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1.1 脂肪酸介绍 | 第10页 |
| 1.2 大肠杆菌脂肪酸代谢的概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 脂肪酸合成及分解途径 | 第10-11页 |
| 1.2.2 脂肪酸合成和分解的调节 | 第11-12页 |
| 1.3 工程化构建游离脂肪酸产量目前的状况 | 第12-14页 |
| 1.4 转录调节因子（FadR）概述 | 第14-15页 |
| 1.5 ACC的结构和功能 | 第15页 |
| 1.6 多不饱和脂肪酸概述 | 第15-16页 |
| 1.7 产PUFA海洋细菌 | 第16页 |
| 1.8 希瓦氏菌中与脂肪酸合成相关的基因和途径 | 第16-18页 |
| 1.9 CRISPR/Cas系统概述 | 第18-19页 |
| 1.10 CRISPR-Cas系统提供一个适应性免疫 | 第19-20页 |
| 1.11 CRISPR/Cas9在基因组编辑上的应用 | 第20-21页 |
| 1.12 CRISPR/Cas9的靶点特异性 | 第21-22页 |
| 1.13 双切口和嵌合的FokI-dCas9策略来达到高度特异性的基因组编辑 | 第22-23页 |
| 1.14 基于网页软件的特异性gRNA设计和脱靶的预测 | 第23页 |
| 1.15 CRISPR/Cas9载体的构建 | 第23-24页 |
| 1.16 CRISPR免疫的前景 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.3 本研究中所用引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第28-29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌及冷海希瓦氏菌的培养 | 第29页 |
| 2.2.3 基因组DNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.4 质粒的制备 | 第30页 |
| 2.2.5 凝胶及PCR产物回收 | 第30-31页 |
| 2.2.6 电转感受态的制备 | 第31页 |
| 2.3 CRISPR/Cas质粒构建及转化 | 第31-39页 |
| 2.3.1 反向PCR扩增pTargetF-spacer | 第31-32页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第32页 |
| 2.3.3 pTargetF-spacer片段的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.4 pTargetF-spacer缺口的修复 | 第33页 |
| 2.3.5 靶向区域上下游同源片段的扩增和相连 | 第33-35页 |
| 2.3.6 电转化及突变体的鉴定 | 第35-38页 |
| 2.3.7 总脂的提取及脂肪酸甲脂化 | 第38-39页 |
| 2.3.7.1 总酯的提取 | 第38页 |
| 2.3.7.2 脂肪酸甲酯化 | 第38页 |
| 2.3.7.3 GC-MS分析 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-47页 |
| 3.1 基因缺失菌株的构建结果 | 第39-40页 |
| 3.1.1 FadD和ppc基因同源片段的扩增 | 第39页 |
| 3.1.2 缺失突变菌的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 缺失体及野生型菌株生长情况 | 第40页 |
| 3.3 突变体菌株的脂肪酸定性及定量 | 第40-42页 |
| 3.4 克隆和鉴定来自冷海希瓦氏菌的基因 | 第42页 |
| 3.5 定量以及定性分析大肠杆菌中的脂肪酸 | 第42-45页 |
| 3.6 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 前景与展望 | 第47-49页 |
| 4.1 提高输出率 | 第47页 |
| 4.2 调节膜饱和度 | 第47页 |
| 4.3 处理代谢瓶颈和调节瓶颈 | 第47-48页 |
| 4.4 结构、生化和基因研究 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 导师评阅表 | 第58页 |
