基于RT-LAMP的口蹄疫病毒(FMDV)通用型快速检测方法构建
中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
1 概述 | 第15-27页 |
1.1 口蹄疫 | 第15-19页 |
1.1.1 流行态势 | 第15-16页 |
1.1.2 传播特点 | 第16页 |
1.1.3 临床及病理特征 | 第16-17页 |
1.1.4 病毒结构 | 第17-19页 |
1.2 FMDV的实验室检测 | 第19-21页 |
1.2.1 病原学检测 | 第19页 |
1.2.2 血清学检测 | 第19-20页 |
1.2.3 分子生物学检测 | 第20-21页 |
1.3 环介导等温扩增技术 | 第21-26页 |
1.3.1 扩增原理 | 第21-23页 |
1.3.2 技术特点 | 第23-25页 |
1.3.3 实际应用 | 第25-26页 |
1.4 研究内容 | 第26页 |
1.5 研究目的与意义 | 第26-27页 |
2 FMDV RT-LAMP引物设计和筛选 | 第27-41页 |
2.1 实验材料 | 第28-29页 |
2.1.1 样品来源 | 第28页 |
2.1.2 实验仪器和设备 | 第28-29页 |
2.1.3 常用材料与试剂 | 第29页 |
2.1.4 主要试剂配制 | 第29页 |
2.2 实验方法 | 第29-34页 |
2.2.1 核酸提取 | 第30页 |
2.2.2 序列比对 | 第30页 |
2.2.3 软件使用 | 第30-31页 |
2.2.4 参数调整 | 第31-32页 |
2.2.5 RT-PCR筛选引物 | 第32-33页 |
2.2.6 荧光RT-LAMP筛选引物 | 第33页 |
2.2.7 克隆与测序 | 第33-34页 |
2.3 实验结果 | 第34-39页 |
2.3.1 模板质量检测结果 | 第34页 |
2.3.2 引物设计结果 | 第34-35页 |
2.3.3 RT-PCR引物筛选结果 | 第35-36页 |
2.3.4 荧光RT-LAMP引物筛选结果 | 第36-37页 |
2.3.5 克隆与测序结果 | 第37-39页 |
2.4 讨论 | 第39-41页 |
3 FMDV RT–LAMP反应体系的优化 | 第41-61页 |
3.1 实验材料 | 第41-42页 |
3.1.1 样品来源 | 第41页 |
3.1.2 实验仪器与设备 | 第41页 |
3.1.3 实验材料与试剂 | 第41页 |
3.1.4 主要试剂配制 | 第41-42页 |
3.2 实验方法 | 第42-46页 |
3.2.1 核酸提取 | 第42页 |
3.2.2 镁离子浓度的优化 | 第42页 |
3.2.3 甜菜碱浓度的优化 | 第42-43页 |
3.2.4 dNTP浓度的优化 | 第43页 |
3.2.5 Bst DNA大片段聚合酶的优化 | 第43-44页 |
3.2.6 AMV反转录酶的优化 | 第44页 |
3.2.7 引物的优化 | 第44-45页 |
3.2.8 染料浓度优化 | 第45页 |
3.2.9 反应温度的优化 | 第45-46页 |
3.2.10 反应时间优化 | 第46页 |
3.3 结果 | 第46-59页 |
3.3.1 模板质量检测结果 | 第46页 |
3.3.2 镁离子浓度的优化 | 第46-47页 |
3.3.3 甜菜碱溶液浓度的优化 | 第47-48页 |
3.3.4 dNTP浓度的优化 | 第48-49页 |
3.3.5 Bst DNA大片段聚合酶的优化 | 第49-50页 |
3.3.6 AMV反转录酶的优化 | 第50-51页 |
3.3.7 引物的优化 | 第51-54页 |
3.3.8 染料浓度的优化 | 第54-57页 |
3.3.9 反应温度的优化 | 第57页 |
3.3.10 反应时间的优化 | 第57-58页 |
3.3.11 优化后的反应体系和条件 | 第58-59页 |
3.4 讨论 | 第59-61页 |
4 FMDV RT-LAMP检测方法的验证 | 第61-81页 |
4.1 实验材料 | 第61-62页 |
4.1.1 样品来源 | 第61页 |
4.1.2 实验仪器设备 | 第61页 |
4.1.3 常用材料与试剂 | 第61-62页 |
4.1.4 主要试剂及配制 | 第62页 |
4.2 实验方法 | 第62-63页 |
4.2.1 核酸提取 | 第62-63页 |
4.2.2 敏感性试验 | 第63页 |
4.2.3 灵敏度试验 | 第63页 |
4.2.4 特异性试验 | 第63页 |
4.3 结果 | 第63-78页 |
4.3.1 模板质量检测结果 | 第63-64页 |
4.3.2 敏感性 | 第64-69页 |
4.3.3 灵敏度 | 第69-78页 |
4.3.4 特异性 | 第78页 |
4.4 讨论 | 第78-81页 |
5 全文总结 | 第81-83页 |
5.1 主要研究内容与结果 | 第81-82页 |
5.2 主要结论 | 第82页 |
5.3 本研究的创新点 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-87页 |
个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第87-88页 |
致谢 | 第88页 |