| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 PRRSV概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 PRRSV的基因结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 Nsp2的结构与高变异性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Nsp2与PRRSV的复制 | 第12-13页 |
| 1.1.4 Nsp2与PRRSV致病性 | 第13页 |
| 1.2 绿色荧光蛋白概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 GFP的结构 | 第14页 |
| 1.2.2 GFP的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 实验一表达gfp基因PRRSV感染性克隆重组质粒的构建 | 第16-32页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株、细胞和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.5 本实验里用到的溶液和试剂以及它们的配制方法 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.2.1 pFL12和pcDNA-EF1-GFP质粒的获取 | 第18-20页 |
| 2.2.2 重叠PCR引物的设计和合成 | 第20页 |
| 2.2.3 重叠PCR对上、下游融合PRRSV Nsp2基因片段的gfp基因的扩增 | 第20-22页 |
| 2.2.4 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 2.2.5 含gfp基因PRRSV感染性克隆重组质粒的构建 | 第22-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 重叠PCR各片段的扩增 | 第27-29页 |
| 2.3.2 Nsp2-gfp基因片段在pFL12中的取代 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 3 实验二表达gfp基因的重组PRRSV的拯救及特性分析 | 第32-44页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 GFP-PRRSV和PRRSV基因组mRNA的体外合成 | 第33-35页 |
| 3.2.2 GFP-PRRSV的拯救 | 第35-38页 |
| 3.2.3 GFP-PRRSV重组病毒在细胞中增殖特性的分析 | 第38-40页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第40-42页 |
| 3.3.1 GFP-PRRSV mRNA的体外合成与表达GFP基因的PRRSV重组病毒的拯救 | 第40-41页 |
| 3.3.2 GFP-PRRSV重组病毒在细胞中增殖特性的分析 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 5 参考文献 | 第45-51页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
