| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 蛋白质的翻译终止过程 | 第14页 |
| 1.2 肽链释放因子及其功能 | 第14-18页 |
| 1.2.1 第一类肽链释放因子的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 第一类肽链释放因子识别终止密码子的机制 | 第16-18页 |
| 1.3 肽链释放因子与其它蛋白因子的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.4 赭纤虫和八肋游仆虫的特点及本课题的研究意义 | 第19-21页 |
| 1.4.1 赭纤虫 | 第19页 |
| 1.4.2 八肋游仆虫 | 第19页 |
| 1.4.3 本课题研究的意义 | 第19-21页 |
| 第二章 N端二级结构模体对eRF1识别终止密码子特异性的影响 | 第21-39页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要的酶和生化试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.3.1 eRF1 N端嵌合体的构建 | 第24-28页 |
| 2.3.2 质粒洗牌技术 | 第28-29页 |
| 2.3.3 双荧光素酶通读效率实验 | 第29-30页 |
| 2.3.4 Western Blotting | 第30页 |
| 2.4 实验结果 | 第30-37页 |
| 2.4.1 eRF1 N端嵌合体重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.4.2 eRF1及其N端结构域嵌合体识别终止密码子的性质 | 第31-32页 |
| 2.4.3 eRF1及其N端嵌合体识别终止密码子的活性 | 第32-36页 |
| 2.4.4 eRF1及其N端嵌合体的杂合蛋白在酵母细胞中稳定表达 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 磷酸化的修饰对终止密码子识别特异性的影响 | 第39-53页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 实验菌株和质粒 | 第39-40页 |
| 3.2.2 主要的酶和生化试剂 | 第40页 |
| 3.2.3 试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 赭纤虫eRF1 N端磷酸化位点的突变 | 第41-43页 |
| 3.3.2 质粒洗牌技术 | 第43页 |
| 3.3.3 双荧光素酶通读效率实验 | 第43页 |
| 3.3.4 Western Blotting | 第43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-52页 |
| 3.4.1 赭纤虫eRF1的N端删除或引入激酶识别序列 | 第43-47页 |
| 3.4.2 磷酸化位点对BeRF1识别终止密码子性质的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.3 删除磷酸化位点对Bj eRF1识别终止密码子效率的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.4 引入磷酸化位点对Bj eRF1识别终止密码子效率的影响 | 第49-51页 |
| 3.4.5 Bj/Sc eRF1突变体杂合蛋白在酵母细胞中稳定表达 | 第51-52页 |
| 3.5 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 赭纤虫第一类肽链释放因子C端结构域的磷酸化修饰 | 第53-58页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 实验菌株及质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 主要的酶及生化试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 试剂的配置 | 第53-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 重组表达质粒的转化和表达 | 第54页 |
| 4.3.2 目的蛋白的纯化 | 第54页 |
| 4.3.3 目的蛋白的Western Blotting分析 | 第54-55页 |
| 4.4 结果 | 第55-56页 |
| 4.4.1 赭纤虫eRF1的C端结构域在大肠杆菌中的表达 | 第55页 |
| 4.4.2 赭纤虫eRF1的C端结构域蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 4.4.3 赭纤虫eRF1的C端结构域的磷酸化分析 | 第56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-58页 |
| 总结与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简介及联系方式 | 第68-69页 |
| 承诺书 | 第69-70页 |
