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靶向多肽修饰在促进内皮细胞增殖方面的研究

中文摘要第4-5页
abstract第5-6页
前言第11-13页
第一章 文献综述第13-29页
    1.1 心血管疾病的治疗现状第13-14页
    1.2 人工血管材料的分类第14页
    1.3 表面修饰提高血液相容性第14-16页
    1.4 表面靶向多肽功能化提高内皮化第16-18页
        1.4.1 RGD肽功能化人工血管材料第16-17页
        1.4.2 REDV肽功能化人工血管架材料第17页
        1.4.3 CAG肽功能化人工血管材料第17-18页
    1.5 基因治疗加速内皮化及血管化第18-26页
        1.5.1 加速内皮化及血管化的基因第18-19页
        1.5.2 基因载体的设计第19-26页
            1.5.2.1 基因载体的分类第20-21页
            1.5.2.2 靶向性肽功能化非病毒载体用于基因传递第21-22页
            1.5.2.3 内涵体/溶酶体逃逸功能化非病毒载体用于基因传递第22-23页
            1.5.2.4 核定位多肽功能化非病毒载体用于基因传递第23-26页
    1.6 本论文研究意义、研究方案及创新点第26-29页
        1.6.1 本论文选题的科学意义第26页
        1.6.2 本论文研究方案及技术路线第26-28页
        1.6.3 论文创新点第28-29页
第二章 REDV肽修饰促进抗菌人工血管材料表面内皮细胞的特异性粘附与增殖第29-57页
    2.1 引言第29-31页
    2.2 实验部分第31-37页
        2.2.1 实验原料与仪器第31-33页
            2.2.1.1 实验原料和试剂第31-32页
            2.2.1.2 主要实验仪器第32-33页
        2.2.2 PCU人工血管支架材料的表面改性和功能化第33-34页
            2.2.2.1 ATRP法制备PCU-g-poly(HPMA-co-EgMA)表面第33-34页
            2.2.2.2 通过点击化学反应固定REDV肽第34页
        2.2.3 物理-化学性能测试与表征第34-35页
            2.2.3.1 表面化学成分的测定第34页
            2.2.3.2 REDV肽含量的测定第34-35页
            2.2.3.3 水接触角(WCA)的测量第35页
            2.2.3.4 吸水率(WU)测试第35页
        2.2.4 血小板粘附试验第35-36页
        2.2.5 细胞培养第36页
        2.2.6 HUVECs和HASMCs的共培养第36-37页
        2.2.7 表面抗菌试验第37页
    2.3 结果与讨论第37-56页
        2.3.1 PCU膜的表面改性第38-40页
        2.3.2 改性修饰后PCU膜表面的亲水性测定第40-42页
        2.3.3 体外血液相容性实验第42-44页
        2.3.4 HUVECs和HASMCs在多肽功能化表面的生长第44-50页
        2.3.5 HUVECs和HASMCs共培养第50-52页
        2.3.6 改性后PCU膜的抗菌性能第52-56页
    2.4 结论第56-57页
第三章 REDV肽功能化载基因纳米粒促进HUVECs的转染和迁移第57-87页
    3.1 前言第57-60页
    3.2 实验部分第60-67页
        3.2.1 实验原料与仪器第60-62页
            3.2.1.1 实验原料和试剂第60-62页
            3.2.1.2 主要实验仪器第62页
        3.2.2 REDV肽功能化纳米粒及纳米粒/pZNF580复合物的制备第62-63页
            3.2.2.1 REDV活性多肽及REVD无活性多肽修饰的纳米粒第62-63页
            3.2.2.2 纳米粒/pZNF580复合物的制备第63页
        3.2.3 纳米粒及纳米粒/pZNF580复合物的物理-化学性质第63-64页
            3.2.3.1 共聚物的表征第63页
            3.2.3.2 多肽含量的测定第63页
            3.2.3.3 纳米粒和载pZNF580复合物的流体力学直径和zeta电位第63-64页
            3.2.3.4 琼脂糖凝胶阻滞实验第64页
        3.2.4 纳米粒/pZNF580复合物对HUVECs的体外转染第64页
        3.2.5 蛋白提取和Western blot分析第64-65页
        3.2.6 实时定量PCR第65-66页
        3.2.7 细胞摄取第66页
        3.2.8 纳米粒/pZNF580复合物的体外细胞毒性第66页
        3.2.9 细胞迁移检测第66-67页
    3.3 结果与讨论第67-86页
        3.3.1 REDV-PEG-PEI-PLMD共聚物的表征第68-70页
        3.3.2 纳米粒和纳米粒/pZNF580复合物的特性第70-72页
        3.3.3 琼脂糖凝胶阻滞实验第72-73页
        3.3.4 HUVECs的体外转染第73-76页
        3.3.5 转染后HUVECs中ZNF580蛋白的Western blot检测第76-78页
        3.3.6 体外实时定量PCR检测第78-79页
        3.3.7 复合物的细胞摄取第79-80页
        3.3.8 体外细胞毒性实验第80-82页
        3.3.9 HUVECs细胞迁移实验第82-86页
    3.4 结论第86-87页
第四章 CAG肽功能化载基因纳米粒促进内皮细胞的转染和血管化第87-112页
    4.1 引言第87-89页
    4.2 实验步骤第89-94页
        4.2.1 实验原料与仪器第89-90页
            4.2.1.1 实验原料和试剂第89-90页
            4.2.1.2 主要实验仪器第90页
        4.2.2 CAG肽功能化纳米粒及纳米粒/pZNF580复合物的制备第90-91页
            4.2.2.1 CAG肽功能化纳米粒的制备第90-91页
            4.2.2.2 纳米粒/pZNF580复合物的制备第91页
        4.2.3 纳米粒和纳米粒/pZNF580复合物的物理-化学性质表征第91-92页
            4.2.3.1 PEI-PLGA-PEI共聚物的表征第91页
            4.2.3.2 共聚物中CAG肽含量的测定第91页
            4.2.3.3 纳米粒和纳米粒/pZNF580复合物的流体力学直径与电位第91-92页
            4.2.3.4 琼脂糖凝胶电泳测试第92页
        4.2.4 纳米粒血液相容性测试第92页
        4.2.5 纳米粒/pZNF580复合物的细胞相容性测试第92页
        4.2.6 体外纳米粒/pZNF580复合物的转染第92-93页
        4.2.7 实时定量PCR测试第93页
        4.2.8 Cy5标记的纳米粒/pZNF580复合物的细胞摄取第93页
        4.2.9 体外血管形成实验第93页
        4.2.10 体内血管形成实验第93-94页
    4.3 结果与讨论第94-110页
        4.3.1 CAG-PEG-PEI-PLGA共聚物的合成和表征第95-98页
        4.3.2 纳米粒及纳米粒/pZNF580复合物的流体力学直径和电位第98-99页
        4.3.3 琼脂糖凝胶电泳实验第99-100页
        4.3.4 纳米粒的血液相容性实验第100-101页
        4.3.5 纳米粒/pZNF580复合物的细胞相容性实验第101-103页
        4.3.6 体外转染HUVECs第103-104页
        4.3.7 实时定量PCR测试第104-105页
        4.3.8 Cy5标记的纳米粒/pZNF580复合物的细胞摄取第105-107页
        4.3.9 体外血管形成实验第107-108页
        4.3.10 体内血管形成实验第108-110页
    4.4 结论第110-112页
第五章 多重靶向修饰促进内皮细胞的转染第112-130页
    5.1 引言第112-115页
    5.2 实验步骤第115-117页
        5.2.1 实验原料与仪器第115页
            5.2.1.1 实验原料和试剂第115页
            5.2.1.2 主要实验仪器第115页
        5.2.2 靶向多肽功能化纳米粒的制备第115-116页
        5.2.3 TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的制备第116页
        5.2.4 TP-NP和TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的物化性能第116页
            5.2.4.1 共聚物结构的表征第116页
            5.2.4.2 TP-NP中多肽含量的测定第116页
            5.2.4.3 纳米粒及其载基因复合物的流体力学直径与电位第116页
            5.2.4.4 琼脂糖凝胶电泳测试第116页
        5.2.5 TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的细胞相容性测试第116-117页
        5.2.6 体外TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的转染第117页
        5.2.7 Cy5标记的载基因复合物的细胞摄取和细胞内分布第117页
    5.3 结果与讨论第117-128页
        5.3.1 TP-PEG-PEI-PCLGA-PEI-PEG-TP共聚物的表征第117-118页
        5.3.2 TP-NP,DNA/TP-NP和TAT-NLS/DNA/TP-NP的粒径和电位第118-121页
        5.3.3 琼脂糖凝胶电泳实验第121页
        5.3.4 DNA/TP-NP和TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的细胞相容性实验第121-123页
        5.3.5 DNA/TP-NP和TAT-NLS/DNA/TP-NP复合物的体外转染第123页
        5.3.6 Cy5标记的载基因复合物的细胞摄取第123-124页
        5.3.7 Cy5标记的载基因复合物的细胞内分布第124-128页
    5.4 结论第128-130页
第六章 结论与展望第130-133页
    6.1 研究总结第130-131页
    6.2 创新点第131-132页
    6.3 展望第132-133页
参考文献第133-146页
发表论文和参加科研情况说明第146-149页
致谢第149-150页

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