| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号对照表 | 第10-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-44页 |
| 1.1 原核细菌的核糖体 | 第11-17页 |
| 1.1.1 原核细菌核糖体的结构 | 第11-14页 |
| 1.1.2 原核细菌核糖体的功能 | 第14-17页 |
| 1.2 原核细菌核糖体的组装 | 第17-22页 |
| 1.2.1 原核细菌核糖体 50S大亚基的体外组装 | 第17-19页 |
| 1.2.2 原核细菌核糖体 50S大亚基的体内组装 | 第19页 |
| 1.2.3 原核细菌核糖体 50S大亚基的体外组装与体内组装对比 | 第19-20页 |
| 1.2.4 原核细菌核糖体组装因子 | 第20-22页 |
| 1.3 原核细菌的严紧反应 | 第22-25页 |
| 1.3.1 原核细菌的严紧反应概述 | 第22页 |
| 1.3.2 RleA和SpoT的结构与功能 | 第22-23页 |
| 1.3.3 大肠杆菌的严紧反应调控 | 第23-25页 |
| 1.4 Obg蛋白的结构与功能 | 第25-33页 |
| 1.4.1 Obg蛋白的结构信息 | 第27-29页 |
| 1.4.2 Obg蛋白在核糖体成熟过程中的功能 | 第29-30页 |
| 1.4.3 Obg蛋白在严紧反应中的功能 | 第30-31页 |
| 1.4.4 Obg蛋白在其他细胞调控过程中的功能 | 第31-32页 |
| 1.4.5 真核细菌中Obg的同源蛋白 | 第32-33页 |
| 1.5 冷冻电子显微学 | 第33-43页 |
| 1.5.1 冷冻电镜概述 | 第33-36页 |
| 1.5.2 透射电子显微镜的基本部件及成像原理 | 第36-39页 |
| 1.5.3 单颗粒三维重构方法 | 第39-41页 |
| 1.5.4 冷冻电子显微学的最新进展 | 第41-43页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第43-44页 |
| 第2章 ObgE与核糖体 50S大亚基的相互作用 | 第44-54页 |
| 2.1 引言 | 第44页 |
| 2.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 2.3.1 pET28a-obgE及其突变的质粒构建 | 第45-46页 |
| 2.3.2 ObgE及其突变蛋白的表达纯化 | 第46-47页 |
| 2.3.3 大肠杆菌核糖体的纯化 | 第47页 |
| 2.3.4 ObgE与核糖体 50S大亚基的结合 | 第47-48页 |
| 2.3.5 ObgE与核糖体 70S复合物的结合 | 第48页 |
| 2.4 实验结果 | 第48-52页 |
| 2.4.1 ObgE蛋白的纯化 | 第48页 |
| 2.4.2 核糖体 50S大亚基纯化结果 | 第48-49页 |
| 2.4.3 ObgE与核糖体 50S大亚基的结合 | 第49-51页 |
| 2.4.4 ObgE与核糖体 70S复合物的结合 | 第51-52页 |
| 2.5 分析讨论 | 第52-54页 |
| 第3章 ObgE与核糖体 50S大亚基复合物的冷冻电镜结构 | 第54-74页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第54页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-63页 |
| 3.3.1 50S·ObgE的冷冻电镜样品制备 | 第54-56页 |
| 3.3.2 冷冻电镜照片收集 | 第56-59页 |
| 3.3.3 冷冻电镜数据处理 | 第59-62页 |
| 3.3.4 分子动力学模拟和原子模型搭建 | 第62-63页 |
| 3.4 实验结果 | 第63-72页 |
| 3.4.1 ObgE·GMPPNP和核糖体 50S大亚基的冷冻电镜结构 | 第63-68页 |
| 3.4.2 ObgE N端结构域与转肽反应中心的相互作用 | 第68-71页 |
| 3.4.3 ObgE的N端结构域的形状模仿A位点tRNA的接受臂 | 第71-72页 |
| 3.5 分析讨论 | 第72-74页 |
| 第4章 ObgE在核糖体组装过程及严紧反应中的作用 | 第74-95页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 实验材料 | 第74-75页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第74页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第74-75页 |
| 4.3 实验方法 | 第75-81页 |
| 4.3.1 细菌生长速率测定 | 第75页 |
| 4.3.2 核糖体组成分析 | 第75页 |
| 4.3.3 共沉淀实验 | 第75-76页 |
| 4.3.4 表面等离子体共振实验 | 第76-79页 |
| 4.3.5 核糖体 70S复合物拆分 | 第79页 |
| 4.3.6 核糖体组装动力学 | 第79-80页 |
| 4.3.7 二肽合成 | 第80页 |
| 4.3.8 体外翻译实验 | 第80-81页 |
| 4.3.9 GTP酶活性测定 | 第81页 |
| 4.4 实验结果 | 第81-93页 |
| 4.4.1 ppGpp促进ObgE与核糖体 50S大亚基的结合 | 第81-84页 |
| 4.4.2 ObgE促进核糖体 70S复合物的解离 | 第84-86页 |
| 4.4.3 ObgE是依赖核糖体 50S大亚基的抑制结合因子 | 第86-91页 |
| 4.4.4 ObgE是一个与众不同的核糖体依赖GTP酶 | 第91-93页 |
| 4.5 分析讨论 | 第93-95页 |
| 第5章 ObgE、SpoT与核糖体 50S大亚基的关系 | 第95-104页 |
| 5.1 引言 | 第95页 |
| 5.2 实验材料 | 第95页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第95页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第95页 |
| 5.3 实验方法 | 第95-98页 |
| 5.3.1 pETDuet-spoT-obgE质粒的构建 | 第95-96页 |
| 5.3.2 SpoT和ObgE的共表达及SpoT的纯化 | 第96页 |
| 5.3.3 SpoT与核糖体 50S大亚基的结合 | 第96-97页 |
| 5.3.4 SpoT、ObgE二者与核糖体 50S大亚基的结合 | 第97页 |
| 5.3.5 50S·SpoT的冷冻电镜样品制备 | 第97-98页 |
| 5.4 实验结果 | 第98-102页 |
| 5.4.1 SpoT和ObgE的共表达及SpoT的纯化 | 第98-99页 |
| 5.4.2 SpoT与核糖体 50S大亚基的结合 | 第99页 |
| 5.4.3 SpoT、ObgE二者与核糖体 50S大亚基的结合 | 第99-101页 |
| 5.4.4 SpoT与核糖体 50S大亚基复合物的冷冻电镜结构 | 第101-102页 |
| 5.5 分析讨论 | 第102-104页 |
| 第6章 讨论与展望 | 第104-111页 |
| 6.1 讨论 | 第104-110页 |
| 6.1.1 ObgE在核糖体 50S大亚基组装方面的作用 | 第104-106页 |
| 6.1.2 GTP酶在核糖体 50S大亚基组装时期的作用顺序 | 第106-109页 |
| 6.1.3 ObgE作为抑制结合因子在严紧反应中发挥重要作用 | 第109页 |
| 6.1.4 ObgE的功能与其他细胞通路的联系 | 第109-110页 |
| 6.2 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第126页 |
