| 个人简历 | 第3-4页 |
| 课题基金来源 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 一、高转移人肝癌细胞株HCCLM3中侧群细胞的分离及干细胞特性鉴定 | 第20-60页 |
| 1 前言 | 第20-22页 |
| 2 材料及方法 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第26页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第26页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第26-27页 |
| 2.2.4 流式细胞仪检测及分选SP细胞 | 第27-29页 |
| 2.2.5 倒置黃光显微镜下观察SP细胞及MP细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.6 自我更新实验 | 第30页 |
| 2.2.7 细胞增殖实验 | 第30页 |
| 2.2.8 平板克隆形成实验 | 第30-31页 |
| 2.2.9 抗癌药物敏感性检测 | 第31页 |
| 2.2.10 迁移和侵袭实验 | 第31-32页 |
| 2.2.11 裸鼠成瘤实验 | 第32页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR检测干细胞相关基因 | 第32-34页 |
| 2.2.13 FCM检测肿瘤干细胞表面标记物 | 第34-35页 |
| 2.3 统计学处理 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-50页 |
| 3.1 HCCLM3细胞中SP细胞检测及分选 | 第36-38页 |
| 3.2 荧光显微镜下观察SP细胞及MP细胞 | 第38-39页 |
| 3.3 SP细胞具备自我更新能力 | 第39-40页 |
| 3.4 SP细胞具有较强的增殖能力 | 第40-41页 |
| 3.5 SP细胞具有较强的克隆形成能力 | 第41页 |
| 3.6 SP细胞对5-Fu及CDDP均具有较强的耐药性 | 第41-42页 |
| 3.7 SP细胞具有较强的迁移和侵袭能力 | 第42-43页 |
| 3.8 SP细胞具有较强的致瘤能力 | 第43-44页 |
| 3.9 实时荧光定量PCR检测干细胞相关基因的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.10 FCM检测干细胞表面标记物的表达情况 | 第45-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 二、慢病毒介导COX-2过表达对肝癌干细胞生物学特性的影响 | 第60-100页 |
| 1 前言 | 第60-62页 |
| 2 材料和方法 | 第62-79页 |
| 2.1 材料 | 第62-66页 |
| 2.2 方法 | 第66-78页 |
| 2.2.1 实时荧光定量PCR检测SP细胞中COX-2基因表达 | 第66-67页 |
| 2.2.2 Western Blotting检测SP细胞中COX-2蛋白表达 | 第67-70页 |
| 2.2.3 HCCLM3细胞转染 | 第70-74页 |
| 2.2.4 COX-2过表达SP细胞分选 | 第74-75页 |
| 2.2.5 COX-2、PTEN及PDCD4 mRNA水平测定 | 第75页 |
| 2.2.6 COX-2、PTEN及PDCD4蛋白水平测定 | 第75-76页 |
| 2.2.7 细胞增殖实验 | 第76页 |
| 2.2.8 平板克隆形成实验 | 第76页 |
| 2.2.9 裸鼠成瘤实验 | 第76-77页 |
| 2.2.10 细胞培养上清PGE2检测 | 第77-78页 |
| 2.3 统计学处理 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-90页 |
| 3.1 SP细胞中COX-2 mRNA及蛋白水平测定 | 第79-80页 |
| 3.2 目的基因COX-2扩增产物的鉴定 | 第80-81页 |
| 3.3 重组慢病毒载体质粒LV-COX-2阳性克隆双酶切结果 | 第81-82页 |
| 3.4 重组慢病毒载体质粒LV-COX-2阳性克隆测序分析 | 第82-83页 |
| 3.5 重组慢病毒载体质粒LV-COX-2的包装结果 | 第83-84页 |
| 3.6 HCCLM3细胞转染 | 第84页 |
| 3.7 COX-2过表达SP细胞分选 | 第84-85页 |
| 3.8 COX-2、PTEN及PDCD4 mRNA及蛋白水平测定 | 第85-86页 |
| 3.9 过表达COX-2对肝癌干细胞体外增殖的影响 | 第86-87页 |
| 3.10 过表达COX-2对肝癌干细胞克隆形成的影响 | 第87-88页 |
| 3.11 过表达COX-2对肝癌干细胞裸鼠成瘤的影响 | 第88-89页 |
| 3.12 过表达COX-2肝癌干细胞培养上清中PGE2含量测定 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 参考文献 | 第93-100页 |
| 三、选择性COX-2抑制剂塞来昔布对肝癌干细胞的抑制作用 | 第100-122页 |
| 1 前言 | 第100-102页 |
| 2 材料与方法 | 第102-108页 |
| 2.1 材料 | 第102-105页 |
| 2.2 方法 | 第105-108页 |
| 2.2.1 细胞增殖实验 | 第105-106页 |
| 2.2.2 平板克隆形成实验 | 第106页 |
| 2.2.3 FCM测细胞凋亡(Annexin V/7-AAD双染色法) | 第106-107页 |
| 2.2.4 裸鼠成瘤实验 | 第107-108页 |
| 2.2.5 细胞培养上清PGE2检测 | 第108页 |
| 2.2.6 COX-2、PTEN及PDCD4 mRNA及蛋白水平测定 | 第108页 |
| 2.3 统计学处理 | 第108页 |
| 3 结果 | 第108-115页 |
| 3.1 Celecoxib对肝癌干细胞体外增殖的影响 | 第108-109页 |
| 3.2 Celecoxib对肝癌干细胞克隆形成的影响 | 第109-110页 |
| 3.3 Celecoxib对肝癌干细胞凋亡的影响 | 第110-111页 |
| 3.4 Celecoxib对肝癌干细胞裸鼠皮下成瘤的影响 | 第111-112页 |
| 3.5 Celecoxib对肝癌干细胞培养上清PGE2含量的影响 | 第112-113页 |
| 3.6 Celecoxib对肝癌干细胞中COX-2、PTEN及PDCD4 mRNA及蛋白表达的影响 | 第113-115页 |
| 4 讨论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-122页 |
| 全文总结 | 第122-124页 |
| 创新性 | 第124-125页 |
| 附录 | 第125-127页 |
| 文献综述 | 第127-142页 |
| 参考文献 | 第134-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 硕博连读期间发表的学术论文 | 第144-146页 |
| 附件 | 第146-204页 |
