| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-13页 |
| 1.1.1 生物柴油发展的历程 | 第11-12页 |
| 1.1.2 莱茵衣藻及其油脂合成代谢 | 第12-13页 |
| 1.2 增加微藻油脂的策略 | 第13-19页 |
| 1.2.1 生物化学工程方法 | 第14-15页 |
| 1.2.2 基因工程方法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 转录因子工程方法 | 第16-19页 |
| 1.3 酰基辅酶A合成酶在油脂代谢中的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.1 酰基辅酶A合成酶的特点 | 第19页 |
| 1.3.2 长链酰基辅酶A合成酶调控脂肪酸的研究 | 第19-20页 |
| 1.4 DOF转录因子在油脂代谢中的功能 | 第20-21页 |
| 1.4.1 DOF转录因子的特性 | 第20-21页 |
| 1.4.2 DOF转录因子基因调控的研究 | 第21页 |
| 1.5 本研究的目的与意义及技术路线 | 第21-25页 |
| 第2章 ACS1与ACS2共沉默对莱茵衣藻油脂代谢及分泌的调控 | 第25-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 实验藻株及菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 常用培养基及主要试剂配制 | 第25-27页 |
| 2.1.3 仪器及试剂 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 pMaa7IR/ACS2IR干涉载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.2 莱茵衣藻的遗传转化 | 第33-34页 |
| 2.2.3 ACS1和ACS2共沉默转基因藻的分子水平检测 | 第34-35页 |
| 2.2.4 BODIPY505/515 快速测定莱茵衣藻胞内TAG含量方法的建立 | 第35-36页 |
| 2.2.5 最优转基因藻株的筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.6 ACS1和ACS2共沉默藻株Mq12中ACS1和ACS2基因表达量检测 | 第37页 |
| 2.2.7 转基因藻株Mq12生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 2.2.8 Mq12胞内TAG含量测定及观察 | 第38页 |
| 2.2.9 Mq12胞内总脂肪酸的提取及检测 | 第38页 |
| 2.2.10 Mq12胞外分泌游离脂肪酸的提取及检测 | 第38-39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-57页 |
| 2.3.1 pMaa7IR/ACS2IR干涉载体的构建 | 第39-42页 |
| 2.3.2 ACS1和ACS2共沉默转基因衣藻阳性克隆筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.3 BODIPY505/515 快速测定莱茵衣藻胞内油脂含量方法的建立 | 第43-44页 |
| 2.3.4 ACS1和ACS2共沉默转基因藻株的筛选 | 第44-45页 |
| 2.3.5 ACS1和ACS2共沉默转基因藻株Mq12中ACS1和ACS2基因表达量 | 第45页 |
| 2.3.6 转基因莱茵衣藻Mq12的生长曲线 | 第45-46页 |
| 2.3.7 Mq12胞内TAG含量测定及油脂滴的观察 | 第46-48页 |
| 2.3.8 Mq12胞内脂肪酸含量及组分的分析 | 第48-54页 |
| 2.3.9 Mq12胞外游离脂肪酸的分泌 | 第54-57页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第57-60页 |
| 第3章 ACS2与DOF转录因子共调控对莱茵衣藻油脂代谢及分泌的影响 | 第60-76页 |
| 3.1 实验材料 | 第60页 |
| 3.1.1 实验藻株 | 第60页 |
| 3.1.2 实验仪器及试剂 | 第60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-61页 |
| 3.2.1 ACS2 RNA干涉载体遗传转化与ACS2和DOF共表达转基因藻株的筛选 | 第60页 |
| 3.2.2 ACS2和DOF共调控转基因藻株Mc7中ACS2和Dof基因表达量 | 第60页 |
| 3.2.3 转基因藻株Mc7生长曲线的绘制 | 第60-61页 |
| 3.2.4 Mc7胞内TAG含量测定及观察 | 第61页 |
| 3.2.5 Mc7胞内总脂肪酸的提取及检测 | 第61页 |
| 3.2.6 Mc7胞外分泌游离脂肪酸的提取及检测 | 第61页 |
| 3.3 实验结果 | 第61-74页 |
| 3.3.1 ACS2和DOF共表达转基因藻株的遗传转化与转基因藻株的筛选 | 第61-62页 |
| 3.3.2 转基因莱茵衣藻Mc7的生长曲线 | 第62-63页 |
| 3.3.3 ACS2和DOF共调控转基因藻株Mc7中ACS2和Dof基因的表达量 | 第63-64页 |
| 3.3.4 Mc7胞内TAG含量测定及观察 | 第64-65页 |
| 3.3.5 Mc7胞内总脂肪酸的测定 | 第65-70页 |
| 3.3.6 Mc7胞外游离脂肪酸的分泌 | 第70-72页 |
| 3.3.7 Mc7与Mq12的油脂含量比较 | 第72-74页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第4章 结论及展望 | 第76-79页 |
| 4.1 主要结论 | 第76-77页 |
| 4.2 微藻脂肪酸调控展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士学位期间的研究 | 第90页 |
