| 项目资金来源 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词英文对照表 | 第8-14页 |
| 第一部分：文献综述 | 第14-23页 |
| 1 EMCV 的分子生物学特征 | 第14-17页 |
| ·病毒基因组结构 | 第14-17页 |
| ·病毒的结构蛋白及功能 | 第15-16页 |
| ·病毒的非结构蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| ·病毒蛋白的裂解 | 第17页 |
| 2 EMCV 的理化特性 | 第17-18页 |
| 3 EMCV 的致病性 | 第18-19页 |
| 4 EMCV 感染的临床症状及病理变化 | 第19-20页 |
| 5 EMC 的流行情况及特点 | 第20页 |
| 6 EMC 的诊断 | 第20-21页 |
| 7 EMC 的防治 | 第21-22页 |
| 8 本论文研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分：实验研究 | 第23-56页 |
| 第一章：EMCV 连续培养VP1 基因稳定性 | 第23-34页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要材料 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要溶液及培养基 | 第24页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第24-28页 |
| ·EMCV 在细胞上的适应性培养及连续传代 | 第24-25页 |
| ·病毒复融 | 第24页 |
| ·适应性培养 | 第24-25页 |
| ·毒液的稀释 | 第24页 |
| ·细胞处理 | 第24-25页 |
| ·细胞接毒 | 第25页 |
| ·连续传代 | 第25页 |
| ·EMCV-VP1 基因的克隆 | 第25-28页 |
| ·引物设计与合成 | 第25页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第25-26页 |
| ·逆转录 | 第26页 |
| ·套式 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·目的基因 PCR 产物的纯化与回收 | 第27页 |
| ·目的基因与pMD-18T 载体的连接 | 第27页 |
| ·连接物的转化、单克隆 | 第27-28页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第28页 |
| ·序列测定 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·EMCV-VP1 基因的 PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收验证 | 第30页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·序列测定结果 | 第31-33页 |
| ·VR-129 株与X74312 序列比对 | 第31页 |
| ·各代次序列比对 | 第31-33页 |
| 4 小结与分析 | 第33-34页 |
| 第二章：结构蛋白 VP1 基因的克隆与表达 | 第34-47页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第34-35页 |
| ·主要材料 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·主要溶液及培养基 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-40页 |
| ·引物设计与合成 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增 | 第36页 |
| ·目的基因PCR 产物的纯化与回收 | 第36页 |
| ·克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| ·目的基因与pMD-18T 载体的连接 | 第36页 |
| ·转化与单克隆 | 第36页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·重组载体的构建 | 第37-38页 |
| ·目的片段和载体酶切 | 第37页 |
| ·目的基因与载体 DNA 的连接 | 第37页 |
| ·转化与单克隆 | 第37页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38页 |
| ·PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·重组蛋白可溶性表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·诱导温度的选择 | 第39页 |
| ·IPTG 浓度的选择 | 第39页 |
| ·诱导时间的选择 | 第39页 |
| ·EMCV-VP1 的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·表达蛋白的Western-Blotting 鉴定 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-46页 |
| ·EMCV-VP1 基因的 PCR 扩增结果 | 第40页 |
| ·EMCV-VP1 纯化与回收验证 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白质可溶性表达条件的优化 | 第43-45页 |
| ·诱导温度对表达的影响 | 第43页 |
| ·IPTG 浓度对表达的影响 | 第43-44页 |
| ·诱导时间对表达的影响 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·重组蛋白的Western blotting 鉴定 | 第45-46页 |
| 4 小结与分析 | 第46-47页 |
| 第三章：双抗原夹心 Elisa 法的建立及初步应用 | 第47-56页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第47-48页 |
| ·主要材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·主要溶液 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| ·酶标抗原制备 | 第48页 |
| ·双抗原夹心Elisa 法建立 | 第48-49页 |
| ·包被浓度确定 | 第48页 |
| ·封闭液选择 | 第48-49页 |
| ·酶标抗原稀释度确定 | 第49页 |
| ·阴阳性对照 | 第49页 |
| ·建立内部参考品 | 第49页 |
| ·血清筛选及灭活 | 第49页 |
| ·内部参考品阴阳性确立 | 第49页 |
| ·双抗原夹心Elisa 法试剂质量评价 | 第49-50页 |
| ·精密性 | 第49-50页 |
| ·稳定性 | 第50页 |
| ·与间接 Elisa 法试剂比较 | 第50页 |
| ·双抗原夹心Elisa 法应用 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-54页 |
| ·EMCV 抗原包被浓度确定 | 第50页 |
| ·封闭液选择结果 | 第50-51页 |
| ·酶标抗原工作浓度的确定 | 第51页 |
| ·内部参考品阴阳性确定 | 第51-52页 |
| ·精密度实验 | 第52-53页 |
| ·稳定性实验 | 第53页 |
| ·与间接法Elisa 试剂的比较结果 | 第53-54页 |
| ·双抗原夹心Elisa 法初步应用 | 第54页 |
| 4 小结与分析 | 第54-56页 |
| 第三部分：结论 | 第56-57页 |
| 1 EMCV-VP1 基因稳定性 | 第56页 |
| 2 EMCV-VP1 可溶性表达 | 第56页 |
| 3 双抗原夹心 Elisa 法的建立及应用 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
| 硕士期间已发表论文 | 第64页 |
| 硕士期间参与的课题研究 | 第64页 |
