| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一、引言 | 第13-24页 |
| 1.1 拟南芥表皮毛发育 | 第13-15页 |
| 1.1.1 拟南芥表皮毛概述 | 第13页 |
| 1.1.2 拟南芥表皮毛发育调控机制 | 第13-15页 |
| 1.2 棉纤维细胞发育 | 第15-18页 |
| 1.2.1 棉纤维细胞发育过程 | 第15-17页 |
| 1.2.2 棉纤维发育的分子调控机制 | 第17-18页 |
| 1.3 BR信号通路 | 第18-20页 |
| 1.3.1 BR概述 | 第18-19页 |
| 1.3.2 BR信号通路分子调控机制 | 第19-20页 |
| 1.4 MYB类转录因子 | 第20-22页 |
| 1.4.1 MYB类转录因子概述 | 第20-21页 |
| 1.4.2 MYB类转录因子的功能 | 第21-22页 |
| 1.5 立题依据和研究意义 | 第22-24页 |
| 二、材料与方法 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第24页 |
| 2.1.3 化学试剂和工具酶 | 第24页 |
| 2.1.4 常用储液 | 第24页 |
| 2.1.5 常用缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.1.6 常用培养基 | 第25页 |
| 2.1.7 常用试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.8 常用仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| 2.2.2 制备农杆菌感受态细胞(用于电击转化) | 第26-27页 |
| 2.2.3 载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第29页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的棉花遗传转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 拟南芥基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.7 棉花基因组DNA的提取(高盐低渗法) | 第30-31页 |
| 2.2.8 棉纤维RNA的提取、消化及逆转录 | 第31页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第31页 |
| 2.2.10 棉花离体胚珠培养实验 | 第31-32页 |
| 2.2.11 蛋白原核表达 | 第32-33页 |
| 2.2.12 Western-blot | 第33-34页 |
| 2.2.13 多克隆抗体的制备 | 第34页 |
| 2.2.14 棉花蛋白提取 | 第34-35页 |
| 三、实验结果 | 第35-58页 |
| 3.1 GhMYBL2载体的构建 | 第35-38页 |
| 3.1.1 GhMYBL2简介 | 第35页 |
| 3.1.2 GhMYBL2克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.1.3 GhMYBL2过量表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.4 GhMYBL2 RNA干扰(RNAi)载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2 GhMYBL2过量表达转基因拟南芥的表型分析 | 第38-42页 |
| 3.2.1 GhMYBL2过量表达转野生型拟南芥筛选鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 GhMYBL2过量表达转野生型拟南芥表皮毛分析 | 第39-40页 |
| 3.2.3 GhMYBL2过量表达转拟南芥突变体gl1筛选鉴定 | 第40页 |
| 3.2.4 GhMYBL2过量表达转拟南芥突变体gl1表皮毛分析 | 第40-41页 |
| 3.2.5 GhMYBL2过量表达转拟南芥突变体bri1表型分析 | 第41-42页 |
| 3.3 棉花转化及GhMYBL2转基因棉花植株鉴定 | 第42-46页 |
| 3.3.1 棉花转化流程 | 第42页 |
| 3.3.2 GhMYBL2转基因棉花植株再生情况统计 | 第42-44页 |
| 3.3.3 GhMYBL2转基因棉花阳性鉴定 | 第44页 |
| 3.3.4 初步对GhMYBL2-RNAi转基因棉花进行分析 | 第44-46页 |
| 3.4 对GhMYBL2转基因棉花T2代进行分析 | 第46-53页 |
| 3.4.1 GhMYBL2转基因棉花阳性鉴定 | 第46页 |
| 3.4.2 GhMYBL2转基因棉花的表达量分析 | 第46-48页 |
| 3.4.3 BL处理的离体胚珠培养 | 第48-50页 |
| 3.4.4 GhMYBL2转基因棉花纤维细胞早期起始发育分析 | 第50-51页 |
| 3.4.5 GhMYBL2转基因棉花9d棉桃大小比较 | 第51页 |
| 3.4.6 GhMYBL2转基因棉花成熟纤维分析 | 第51-52页 |
| 3.4.7 BR信号通路中与棉纤维发育相关的基因在GhMYBL2转基因棉花纤维中的表达分析 | 第52-53页 |
| 3.5 GhMYBL2抗体制备及Western blot分析 | 第53-58页 |
| 3.5.1 GhMYBL2可溶性蛋白的诱导 | 第53-54页 |
| 3.5.2 GhMYBL2可溶性蛋白的纯化 | 第54页 |
| 3.5.3 GhMYBL2多克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| 3.5.4 GhMYBL2多克隆抗体效价检测 | 第55页 |
| 3.5.5 运用GhMYBL2多克隆抗体检测棉花各个组织总蛋白中的目的蛋白 | 第55-57页 |
| 3.5.6 运用GhMYBL2多克隆抗体检测棉花各个时期纤维中的核蛋白 | 第57-58页 |
| 四、讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 GhMYBL2可能在棉纤维发育中起着重要作用 | 第58页 |
| 4.2 GhMYBL2可能参与BR信号通路来调控棉纤维的发育 | 第58-59页 |
| 4.3 GhMYBL2在棉纤维发育过程中可能是一个负调控因子 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 在校期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
