| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 一、前言 | 第8-18页 |
| 1. 丙型肝炎病毒 | 第8-10页 |
| 1.1. HCV的分子生物学特征:基因组结构、编码的病毒蛋白及功能 | 第8页 |
| 1.2. HCV的流行病学特征 | 第8-9页 |
| 1.3. HCV感染的治疗 | 第9-10页 |
| 2. 干扰素与干扰素信号通路 | 第10-11页 |
| 2.1. 干扰素 | 第10页 |
| 2.2. 干扰素信号通路 | 第10-11页 |
| 2.3. 干扰素刺激基因12a | 第11页 |
| 3. HCV耐受干扰素国内外研究现状与发展趋势 | 第11-12页 |
| 4. 本研究目的和意义 | 第12-13页 |
| 4.1. 本研究目的 | 第12-13页 |
| 4.2. 本研究意义 | 第13页 |
| 5. 本研究技术路线 | 第13-18页 |
| 5.1. ISG12a高表达质粒的构建及表达验证 | 第13-14页 |
| 5.2. ISG12a对HCV以及IFNα抗病毒活性影响的研究 | 第14-15页 |
| 5.3. ISG12a对Ⅰ型干扰素信号通路影响的研究 | 第15-16页 |
| 5.4. ISG12a对细胞凋亡和自噬影响的研究 | 第16-17页 |
| 5.5. ISG12a与USP18蛋白质相互作用的研究 | 第17-18页 |
| 二、实验材料和实验方法 | 第18-49页 |
| 实验材料 | 第18-28页 |
| 1. 主要实验仪器 | 第18-19页 |
| 2. 实验耗材 | 第19-20页 |
| 3. 常用试剂盒 | 第20-21页 |
| 4. 实验常用试剂 | 第21-22页 |
| 5. 菌株及培养基 | 第22页 |
| 6. 细胞及对应培养基 | 第22-23页 |
| 7. 转染质粒及载体 | 第23-25页 |
| 8. 荧光实时定量PCR引物 | 第25页 |
| 9. 常用试剂配置方法 | 第25-28页 |
| 实验方法 | 第28-49页 |
| 1. 细胞培养 | 第28-30页 |
| 2. 干扰素α刺激Huh7.5.1细胞 | 第30页 |
| 3. 总RNA提取 | 第30-31页 |
| 4. 逆转录PCR | 第31-32页 |
| 5. 利用逆转录所得cDNA扩增ISG12a基因目的片段 | 第32-33页 |
| 6. 目的片段与测序载体的连接 | 第33页 |
| 7. 连接产物转化实验 | 第33-34页 |
| 8. 单克隆菌的挑选 | 第34页 |
| 9. 小量质粒提取 | 第34-35页 |
| 10. 双酶切质粒验证 | 第35页 |
| 11. 测序验证 | 第35页 |
| 12. 目的DNA片段胶回收 | 第35-37页 |
| 13. 大提质粒 | 第37-38页 |
| 14. 细胞转染 | 第38-39页 |
| 15. 荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 16. 细胞总蛋白质提取 | 第40-41页 |
| 17. BCA法蛋白质定量 | 第41-42页 |
| 18. 蛋白质免疫印记western blot | 第42-45页 |
| 19. 双荧光报告基因 | 第45-46页 |
| 20. 酶联免疫吸附试验ELISA | 第46页 |
| 21. 流式细胞仪凋亡检测 | 第46-47页 |
| 22. 免疫共沉淀CO-IP | 第47-48页 |
| 23. 统计学分析 | 第48-49页 |
| 三、实验结果 | 第49-62页 |
| 1. pcDNA3.1-3tag-ISG12a高表达质粒的成功构建及表达验证 | 第49-53页 |
| 1.1 在hela和huh7.5.1细胞系内ISG12a被干扰素α刺激高表达 | 第49-51页 |
| 1.2 ISG12a基因片段成功连接到测序载体pTA2 | 第51-52页 |
| 1.3 将测序正确的ISG12a片段连接到表达载体pcDNA3.1-3tag和酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 1.4 pc-DNA3.1-3tag-ISG12a质粒在huh7.5.1细胞系内高表达 | 第53页 |
| 2. 高表达ISG12a质粒可以抑制丙型肝炎病毒的复制 | 第53-55页 |
| 3. 高表达ISG12a质粒可以促进Ⅰ型干扰素的生成 | 第55-56页 |
| 4. 高表达ISG12a激活Ⅰ型干扰素信号通路 | 第56-59页 |
| 4.1 高表达ISG12a可以促进STAT1磷酸化 | 第56页 |
| 4.2 ISG12a提高ISRE活性 | 第56-57页 |
| 4.3 高表达ISG12a可以促进其他ISG的表达 | 第57-59页 |
| 5. ISG12a增强IFN α的抑制HCV复制的活性 | 第59页 |
| 6. 高表达ISG12a并不影响细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 7. 高表达ISG12a不影响细胞自噬 | 第60-61页 |
| 8. ISG12a与USP18没有蛋白质相互作用 | 第61-62页 |
| 四、讨论 | 第62-64页 |
| 五、结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 英文缩略词 | 第70-71页 |
| 文献综述 | 第71-86页 |
| REFERENCES | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 研究生简历 | 第87-88页 |
