| 中文摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 鸭坦布苏病毒的生物学特征 | 第14-18页 |
| 1.1.1 鸭坦布苏病毒的形态结构 | 第14页 |
| 1.1.2 鸭坦布苏病毒的基因组特征 | 第14-15页 |
| 1.1.3 鸭坦布苏病毒编码蛋白特征 | 第15-16页 |
| 1.1.4 黄病毒E蛋白的结构与功能特点 | 第16-17页 |
| 1.1.5 黄病毒的入胞机制 | 第17-18页 |
| 1.1.6 黄病毒在细胞内的复制过程 | 第18页 |
| 1.1.7 鸭坦布苏病毒的培养特性 | 第18页 |
| 1.2 坦布苏病毒感染的症状和病理变化 | 第18-19页 |
| 1.3 坦布苏病毒感染的防制 | 第19页 |
| 1.4 蛋白质相互作用概述 | 第19-21页 |
| 1.5 cDNA文库的概述 | 第21-22页 |
| 1.6 酵母双杂交技术 | 第22-27页 |
| 1.6.1 酵母双杂交技术原理 | 第22-23页 |
| 1.6.2 酵母双杂交技术的特点 | 第23-24页 |
| 1.6.3 酵母双杂交技术的应用 | 第24-27页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-44页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株、毒株、载体及细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要溶液的配置 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2 鸭胚成纤维细胞cDNA文库的构建 | 第30-35页 |
| 2.2.1 鸭胚成纤维细胞的培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 鸭胚成纤维细胞的传代 | 第31页 |
| 2.2.3 鸭胚成纤维细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| 2.2.5 双链cDNA的扩增及纯化 | 第32页 |
| 2.2.6 双链cDNA的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 Y187酵母感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.8 文库的制备 | 第34页 |
| 2.2.9 文库的收获 | 第34页 |
| 2.2.10 文库的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3 坦布苏病毒E蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 | 第35-44页 |
| 2.3.1 重组诱饵质粒pGBKT7-E的构建 | 第35-41页 |
| 2.3.2 Y2H酵母感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.3.3 诱饵质粒转化Y2H酵母感受态细胞 | 第41页 |
| 2.3.4 诱饵质粒的自激活与毒性检测 | 第41页 |
| 2.3.5 cDNA文库的筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.6 酵母质粒的提取 | 第42-43页 |
| 2.3.7 阳性克隆的鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-51页 |
| 3.1 鸭胚成纤维细胞RNA的提取 | 第44页 |
| 3.2 双链cDNA的合成与纯化 | 第44-46页 |
| 3.3 文库质量鉴定 | 第46页 |
| 3.4 E基因片段的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 3.5 诱饵质粒pGBKT7-E的构建 | 第47页 |
| 3.6 诱饵质粒pGBKT7-E的双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.7 诱饵质粒pGBKT7-E的自激活鉴定 | 第48-49页 |
| 3.8 诱饵质粒pGBKT7-E的毒性鉴定 | 第49页 |
| 3.9 诱饵质粒pGBKT7-E与cDNA文库的双杂交筛选 | 第49-50页 |
| 3.10 阳性质粒的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第66页 |