| 项目资金来源 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第1部分 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 动物细胞的培养技术及培养方法 | 第14-15页 |
| 1.1 动物细胞培养简述 | 第14页 |
| 1.2 动物细胞培养方法 | 第14-15页 |
| 1.2.1 贴壁培养 | 第14-15页 |
| 1.2.2 悬浮培养 | 第15页 |
| 2 BHK-21细胞 | 第15-16页 |
| 2.1 BHK-21细胞系特性 | 第15页 |
| 2.2 BHK-21细胞在兽用疫苗应用 | 第15-16页 |
| 3 BHK-21细胞大规模培养 | 第16-21页 |
| 3.1 生物反应器的应用 | 第17-19页 |
| 3.1.1 机械搅拌式生物反应器 | 第17页 |
| 3.1.2 气升式生物反应器 | 第17-18页 |
| 3.1.3 固定床生物反应器 | 第18页 |
| 3.1.4 一次性生物反应器 | 第18-19页 |
| 3.2 BHK-21细胞个性化培养基 | 第19页 |
| 3.3 细胞培养工艺的选择 | 第19-20页 |
| 3.3.1 分批培养 | 第19-20页 |
| 3.3.2 流加培养 | 第20页 |
| 3.4 细胞株驯化与筛选 | 第20-21页 |
| 4 本论文研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第2部分 试验研究 | 第22-62页 |
| 第1章 BHK-21悬浮细胞株细胞的生物学鉴定 | 第22-33页 |
| 1. 引言 | 第22页 |
| 2. 材料及仪器设备 | 第22-24页 |
| 2.1 主要材料 | 第22页 |
| 2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 3. 实验步骤及方法 | 第24-25页 |
| 3.1 BHK-21悬浮细胞复苏 | 第24页 |
| 3.2 细胞活力测定 | 第24页 |
| 3.3 细胞传代培养 | 第24页 |
| 3.4 BHK-21悬浮细胞形态观察 | 第24页 |
| 3.5 细胞生长曲线 | 第24-25页 |
| 3.6 无菌检查 | 第25页 |
| 3.7 外源病毒污染检查 | 第25页 |
| 3.8 支原体检查 | 第25页 |
| 3.9 染色体统计 | 第25页 |
| 3.10 乳酸脱氢同工酶酶谱分析 | 第25页 |
| 4. 结果 | 第25-32页 |
| 4.1 BHK-21悬浮细胞复苏活率 | 第25页 |
| 4.2 BHK-21悬浮细胞形态 | 第25-26页 |
| 4.3 BHK-21悬浮细胞生长特性 | 第26-27页 |
| 4.3.1 生长曲线 | 第26-27页 |
| 4.4 无菌检查 | 第27页 |
| 4.5 外源病毒因子检查 | 第27-30页 |
| 4.5.1 细胞病变因子检查 | 第27-28页 |
| 4.5.2 血吸附因子检查 | 第28-29页 |
| 4.5.3 直接荧光抗体法特异性病毒检查 | 第29-30页 |
| 4.6 支原体检查 | 第30-31页 |
| 4.6.1 培养法检查 | 第30-31页 |
| 4.6.2 荧光染色检查 | 第31页 |
| 4.7 染色体统计分析 | 第31-32页 |
| 4.8 乳酸脱氢酶同工酶酶普分析 | 第32页 |
| 5. 小结与分析 | 第32-33页 |
| 第2章 BHK-21悬浮细胞的单细胞克隆及克隆株筛选 | 第33-40页 |
| 1. 引言 | 第33页 |
| 2. 材料及仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.1 主要材料 | 第33页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 3. 方法 | 第34-37页 |
| 3.1 BHK-21悬浮细胞单细胞的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.1 有限稀释法单细胞制备 | 第34页 |
| 3.1.2 琼脂培养层的制备 | 第34-35页 |
| 3.1.2.1 琼脂糖的制备 | 第34-35页 |
| 3.1.2.2 下层琼脂的制备 | 第35页 |
| 3.1.2.3 上层琼脂的制备 | 第35页 |
| 3.1.3 单细胞接种 | 第35页 |
| 3.1.3.1 96孔平底培养板单细胞接种 | 第35页 |
| 3.1.3.2 96孔U型培养板单细胞接种 | 第35页 |
| 3.1.3.3 琼脂培养层单细胞接种 | 第35页 |
| 3.1.4 单细胞培养孔的挑选 | 第35页 |
| 3.1.5 培养孔换液 | 第35页 |
| 3.2 单细胞克隆株的放大培养 | 第35-36页 |
| 3.3 单细胞克隆株的冻存 | 第36-37页 |
| 4. 结果 | 第37-38页 |
| 4.1 BHK-21悬浮细胞单细胞的克隆 | 第37页 |
| 4.2 单细胞克隆株的扩大培养及冻存 | 第37-38页 |
| 5. 小结与分析 | 第38-40页 |
| 第3章 单细胞克隆株中高密度生长株的筛选及检测鉴定 | 第40-50页 |
| 1. 引言 | 第40页 |
| 2. 材料及仪器设备 | 第40-42页 |
| 2.1 主要材料 | 第40页 |
| 2.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3. 方法 | 第42-43页 |
| 3.1 单克隆细胞复苏 | 第42页 |
| 3.2 复苏细胞活力测定 | 第42页 |
| 3.3 高密度克隆株的筛选 | 第42页 |
| 3.4 无菌检查 | 第42页 |
| 3.5 外源病毒检查 | 第42页 |
| 3.6 支原体检查 | 第42页 |
| 3.7 染色体核型分析 | 第42页 |
| 3.8 同工酶酶谱分析 | 第42页 |
| 3.9 口蹄疫病毒毒价测定 | 第42页 |
| 3.10 高密度单细胞克隆株的冻存 | 第42-43页 |
| 4. 结果 | 第43-48页 |
| 4.1 细胞复苏 | 第43页 |
| 4.2 高密度单细胞克隆株的筛选 | 第43-44页 |
| 4.3 无菌检查 | 第44页 |
| 4.4 外源病毒检查 | 第44-45页 |
| 4.4.1 致细胞病变因子检查 | 第44页 |
| 4.4.2 血吸附因子检查 | 第44-45页 |
| 4.4.3 直接荧光抗体法特异性病毒检查 | 第45页 |
| 4.5 支原体检查 | 第45页 |
| 4.6 染色体条数统计 | 第45-47页 |
| 4.7 乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析 | 第47-48页 |
| 4.8 高密度单细胞克隆株的冻存 | 第48页 |
| 4.9 口蹄疫病毒表达试验 | 第48页 |
| 5. 小结与分析 | 第48-50页 |
| 第4章 单细胞克隆株细胞培养工艺的研究 | 第50-56页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 材料及仪器设备 | 第50页 |
| 2.1 主要材料 | 第50页 |
| 2.2 主要试剂 | 第50页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3 方法 | 第50-51页 |
| 3.1 不同接种密度培养 | 第50-51页 |
| 3.2 摇瓶中批培养 | 第51页 |
| 3.3 摇瓶中流加培养 | 第51页 |
| 3.4 连续传代培养 | 第51页 |
| 4 结果 | 第51-55页 |
| 4.1 CL18细胞不同接种密度培养 | 第51-52页 |
| 4.2 CL18细胞批培养 | 第52-53页 |
| 4.3 CL18流加培养 | 第53-54页 |
| 4.4 CL18细胞传代稳定性 | 第54-55页 |
| 5 小结与分析 | 第55-56页 |
| 第5章 5L生物反应器培养单克隆细胞 | 第56-62页 |
| 1. 引言 | 第56页 |
| 2. 材料及仪器设备 | 第56-57页 |
| 2.1 主要材料 | 第56页 |
| 2.2 主要试剂 | 第56页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 3. 方法 | 第57页 |
| 3.1 生物反应器准备 | 第57页 |
| 3.2 接种细胞 | 第57页 |
| 3.3 培养条件控制 | 第57页 |
| 3.4 批培养 | 第57页 |
| 3.5 流加培养 | 第57页 |
| 4. 结果 | 第57-60页 |
| 4.1 5LNBS生物反应器的准备 | 第57-58页 |
| 4.2 生物反应器培养克隆株细胞过程控制 | 第58-59页 |
| 4.3 生物反应器批培养CL18细胞 | 第59页 |
| 4.4 生物反应器流加培养CL18细胞 | 第59-60页 |
| 5. 小结与分析 | 第60-62页 |
| 第3部分 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
| 硕士期间已发表论文与专利 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |