| 项目资金来源 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 缩略语表 | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 脑心肌炎病毒(EMCV)概述 | 第13-15页 |
| 1.1 EMCV的起源与分类 | 第13页 |
| 1.2 EMCV的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.3 病毒基因组所编码的蛋白 | 第14页 |
| 1.4 流行病学调查 | 第14-15页 |
| 2 CD63研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 CD63的发现与分布 | 第15-16页 |
| 2.2 CD63的分子结构 | 第16页 |
| 2.3 CD63的功能 | 第16-19页 |
| 2.3.1 活化分子标记物 | 第16-17页 |
| 2.3.2 肿瘤转移抑制因子 | 第17-18页 |
| 2.3.3 CD63与HIV | 第18页 |
| 2.3.4 CD63与生殖系统 | 第18-19页 |
| 2.3.5 CD63与免疫 | 第19页 |
| 3 TMEM39A研究进展 | 第19-20页 |
| 4 VCAM-1研究进展 | 第20-22页 |
| 4.1 VCAM-1的分布与分子结构 | 第20页 |
| 4.2 VCAM-1的功能 | 第20-22页 |
| 4.2.1 VCAM-1与炎症反应 | 第21页 |
| 4.2.2 VCAM-1与肿瘤 | 第21页 |
| 4.2.3 VCAM-1参与造血细胞的生长发育 | 第21-22页 |
| 4.2.4 VCAM-1与细胞因子、趋化因子 | 第22页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验研究 | 第23-58页 |
| 第一章 瞬时过表达膜蛋白细胞的构建 | 第23-43页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第23-26页 |
| 1.1 主要材料 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第24-26页 |
| 1.3.1 抗生素及培养基配置方法 | 第24-25页 |
| 1.3.2 SDS-PAGE及Western Blot所需试剂配置方法 | 第25-26页 |
| 1.4 仪器设备 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-34页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第26-31页 |
| 2.1.1 引物设计及合成 | 第26-27页 |
| 2.1.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.1.3 目的基因扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.4 重组表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.1.5 表达载体的鉴定 | 第31页 |
| 2.2 细胞瞬时转染及过表达效果检测 | 第31-34页 |
| 2.2.1 细胞瞬时转染 | 第31-32页 |
| 2.2.2 过表达效果检测 | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| 3.1 CD63瞬时过表达细胞的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.1 CD63 PCR扩增与酶切及测序验证 | 第34-36页 |
| 3.1.2 CD63基因与蛋白水平过表达效果检测 | 第36页 |
| 3.2 TMEM39A瞬时过表达细胞的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.1 TMEM39A PCR扩增与酶切及测序验证 | 第36-38页 |
| 3.2.2 TMEM39A基因与蛋白水平过表达效果检测 | 第38-39页 |
| 3.3 VCAM-1瞬时过表达细胞的构建 | 第39-42页 |
| 3.3.1 VCAM-1 PCR扩增与酶切及测序验证 | 第39-41页 |
| 3.3.2 VCAM-1基因与蛋白水平过表达效果检测 | 第41-42页 |
| 4 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第二章 瞬时敲低膜蛋白细胞的构建 | 第43-49页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第43-44页 |
| 1.1 主要材料 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 1.3 仪器设备 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| 2.1 siRNA干扰序列的设计及合成 | 第44-45页 |
| 2.2 细胞培养 | 第45页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第45页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第45页 |
| 2.3 细胞的种板及转染 | 第45-46页 |
| 2.3.1 有效siRNA筛选 | 第46页 |
| 2.3.2 siRNA最适浓度的筛选 | 第46页 |
| 2.3.3 siRNA最适时间的筛选 | 第46页 |
| 2.4 RNAi干扰效率检测 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| 3.1 CD63基因与蛋白水平敲低效果检测 | 第46-47页 |
| 3.2 TMEM39A基因与蛋白水平敲低效果检测 | 第47-48页 |
| 3.3 VCAM-1基因与蛋白水平敲低效果检测 | 第48页 |
| 4 小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 瞬时过表达及敲低宿主细胞膜蛋白后攻毒EMCV | 第49-58页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第49-50页 |
| 1.1 主要材料 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 1.3 仪器设备 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| 2.1 瞬时过表达及敲低宿主蛋白后EMCV感染实验 | 第50页 |
| 2.2 基因水平检测EMCV病毒粒子含量 | 第50-52页 |
| 2.2.1 提取RNA | 第50页 |
| 2.2.2 反转录 | 第50-51页 |
| 2.2.3 Real-time PCR | 第51-52页 |
| 2.3 蛋白水平检测EMCV病毒粒子含量 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| 3.1 CD63过表达与敲低对EMCV感染宿主细胞的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 TMEM39A过表达与敲低对EMCV感染宿主细胞的影响 | 第53-55页 |
| 3.3 VCAM-1过表达与敲低对EMCV感染宿主细胞的影响 | 第55-56页 |
| 4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第三部分 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
| 硕士期间已发表论文 | 第69页 |
