| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 胞苷 | 第9-11页 |
| 1.1.1 胞苷的物理化学性质 | 第9页 |
| 1.1.2 胞苷的用途 | 第9-10页 |
| 1.1.3 胞苷的工业生产现状 | 第10-11页 |
| 1.2 B.subtilis胞苷合成和分解途径 | 第11-12页 |
| 1.2.1 尿苷酸的生物合成途径 | 第11页 |
| 1.2.2 胞苷的合成和分解代谢 | 第11-12页 |
| 1.3 pyrG基因的表达调控机制 | 第12-13页 |
| 1.4 产胞苷枯草芽孢杆菌的诱变育种 | 第13-15页 |
| 1.5 本文的研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 PCR引物与合成片段 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 B. subtilis染色体DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 CTAB法提取质粒（用于B. subtilis质粒提取） | 第24页 |
| 2.2.3 碱裂解法大规模提取质粒（用于E. coli质粒提取） | 第24-25页 |
| 2.2.4 普通PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.5 菌落PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.6 两步法重叠PCR | 第26-28页 |
| 2.2.7 一步法重叠PCR | 第28-29页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.2.9 DNA的切胶纯化与回收 | 第29-30页 |
| 2.2.10 DNA的酶切反应 | 第30页 |
| 2.2.11 DNA的连接反应 | 第30-31页 |
| 2.2.12 B. subtilis的感受态转化 | 第31页 |
| 2.2.13 适用于无标记修饰方案的B. subtilis的感受态转化 | 第31页 |
| 2.2.14 E. coli感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.15 E. coli感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.2.16 DNA的测序与序列比对 | 第32页 |
| 2.2.17 菌种的保藏 | 第32-33页 |
| 2.2.18 摇瓶发酵及发酵液分析方法 | 第33页 |
| 2.2.19 发酵产物的定性定量分析 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-57页 |
| 3.1 新霉素反向选择盒的整合 | 第34-37页 |
| 3.1.1 UaraR-Para-neo-DaraR片段的拼接 | 第34-36页 |
| 3.1.2 新霉素反向选择盒的整合和转化子筛选 | 第36-37页 |
| 3.2 胞苷脱氨酶缺陷型菌株的构建 | 第37-40页 |
| 3.2.1 UDCRG-cdd片段的拼接 | 第38-39页 |
| 3.2.2 转化及转化子的筛选和验证 | 第39-40页 |
| 3.3 pyrG基因组成型表达菌株的构建 | 第40-49页 |
| 3.3.1 pyrG基因的修饰方案 | 第41页 |
| 3.3.2 UDCRG-pyrG片段的拼接 | 第41-43页 |
| 3.3.3 转化及转化子的筛选 | 第43-45页 |
| 3.3.4 pyrG基因修饰菌株的生长和发酵特点 | 第45-49页 |
| 3.4 pyrG基因高表达菌株的构建 | 第49-57页 |
| 3.4.1 gsiB稳定子修饰pyr G基因的mRNA前导区 | 第49-52页 |
| 3.4.2 PAs表达盒修饰pyrG基因 | 第52-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 主要结论 | 第57页 |
| 4.2 创新点 | 第57-58页 |
| 4.3 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
