| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文章综述 | 第13-23页 |
| 1 重金属及其危害 | 第13-14页 |
| 2 水体重金属污染现状 | 第14页 |
| 3 重金属修复方法 | 第14-18页 |
| 3.1 物理化学修复方法 | 第14-15页 |
| 3.2 农业生态修复技术 | 第15-16页 |
| 3.3 生物修复技术 | 第16-18页 |
| 4 植物的重金属抗性机制 | 第18-19页 |
| 4.1 螯合作用 | 第18-19页 |
| 4.2 区室化作用 | 第19页 |
| 4.3 细胞修复 | 第19页 |
| 5 基因工程在植物修复中应用 | 第19-21页 |
| 6 植物修复应用前景 | 第21-23页 |
| 第二章 荷花NnγGCS基因克隆及序列分析 | 第23-37页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| 1.1 植物材料 | 第24页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 1.2.1 试剂 | 第24页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第24页 |
| 1.2.3 菌株与载体 | 第24-25页 |
| 1.2.4 引物序列 | 第25页 |
| 1.3 实验方法 | 第25-30页 |
| 1.3.1 基因简并引物设计 | 第25-26页 |
| 1.3.2 RNA提取 | 第26页 |
| 1.3.3 1st-strand cDNA合成及检测 | 第26-27页 |
| 1.3.4 PCR扩增 | 第27页 |
| 1.3.5 片段纯化与连接转化 | 第27页 |
| 1.3.6 重组子筛选及测序 | 第27-28页 |
| 1.3.7 3'RACE-PCR扩增 | 第28页 |
| 1.3.8 5'RACE | 第28-29页 |
| 1.3.9 cDNA全长序列的获得 | 第29-30页 |
| 1.3.10 序列比对与进化树构建 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.1 RNA提取质量与反转录效果检测 | 第30-31页 |
| 2.2 目的中间片段序列测定 | 第31页 |
| 2.3 RACE-PCR结果 | 第31页 |
| 2.4 荷花NnγGCS基因全长序列的获得 | 第31-32页 |
| 2.5 氨基酸序列同源性比对 | 第32-34页 |
| 2.6 荷花NnγGCS基因氨基酸序列系统进化树构建 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 NnγGCS基因表达与亚细胞定位 | 第37-47页 |
| 第一节 镉胁迫后NnγGCS在荷花中表达分析 | 第37-43页 |
| 1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 1.1 植物材料 | 第37-38页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第38页 |
| 1.2.1 试剂 | 第38页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第38页 |
| 1.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 1.3.1 荷花RNA提取及cDNA合成 | 第38页 |
| 1.3.2 Real-Time PCR分析 | 第38-39页 |
| 1.3.3 荷花各器官镉含量的测定 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-42页 |
| 2.1 荷花NnγGCS基因组织定量分析 | 第39-40页 |
| 2.2 镉胁迫下荷花叶和根部NnγGCS表达响应 | 第40页 |
| 2.3 镉胁迫下荷花组织重金属积累量 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 第二节 NnγGCS基因亚细胞定位 | 第43-47页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第44页 |
| 1.2.1 试剂及菌株 | 第44页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第44页 |
| 1.2.3 菌株与载体 | 第44页 |
| 1.3 实验方法 | 第44-45页 |
| 1.3.1 正义表达载体构建 | 第44-45页 |
| 1.3.2 洋葱表皮细胞瞬时表达 | 第45页 |
| 1.3.3 显微镜观察 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 荷花NnγGCS基因的功能分析 | 第47-57页 |
| 1 材料与方法 | 第47-51页 |
| 1.1 材料 | 第47-48页 |
| 1.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 1.2.1 正义表达载体构建 | 第48页 |
| 1.2.2 拟南芥的遗传转化 | 第48页 |
| 1.2.3 拟南芥播种 | 第48页 |
| 1.2.4 拟南芥转化 | 第48-49页 |
| 1.2.5 拟南芥种子收获 | 第49页 |
| 1.3 筛选阳性拟南芥 | 第49-50页 |
| 1.3.1 转基因植株鉴定 | 第49-50页 |
| 1.3.2 转基因拟南芥表达分析 | 第50页 |
| 1.4 荷花NnγGCS基因在拟南芥中功能验证 | 第50-51页 |
| 1.4.1 根长的比较 | 第50页 |
| 1.4.2 镉胁迫下种子发芽率 | 第50页 |
| 1.4.3 镉胁迫下拟南芥植株生长量影响 | 第50页 |
| 1.4.4 镉胁迫下生理指标变化 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| 2.1 转基因拟南芥鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2 镉胁迫下根长比较 | 第52-53页 |
| 2.3 镉胁迫下发芽率比较 | 第53页 |
| 2.4 镉胁迫下拟南芥植株生长量变化 | 第53页 |
| 2.5 镉胁迫下植株内生理指标变化 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 全文结论 | 第57-59页 |
| 创新之处 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 发表论文 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |